| 摘要 |
<p>Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung hochreiner humaner GAD-1- und GAD-2-Proteine unter Verwendung des Baculovirus/Sf9-Expressionssystems, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfaßt: a) Herstellung von cDNA-Sequenzen aus humanen cDNA-Bibliotheken, die jeweils GAD-1- und GAD-2-Proteine in voller Länge bzw. Abwandlungen davon codieren; b) Insertion der GAD-1- oder GAD-2-cDNA-Sequenz in einen Baculovirus-Transfervektor; c) Co-Transfektion von Sf9-Zellen mit GAD-1- oder GAD-2- cDNA enthaltenden Baculovirus-Transfervektoren und Baculovirus-DNA zur Erzeugung rekombinanter Baculoviren; d) Identifizierung, Selektion und Anreicherung von rekombinanten Baculoviren; e) Gewinnung des GAD-1- oder GAD-2-Proteins nach Infektion von Sf9-Zellen mit rekombinanten Baculoviren; und f) Reinigung des rekombinanten GAD-1- oder GAD-2-Proteins. Das erfindungsgemäße Verfahren stellt hochreine, fast homogene GAD-1- bzw. GAD-2-Proteine mit einer hohen Expressionsrate und einem hohen Reinigungsgrad zur Verfügung. Die isolierten GAD-Proteine werden in Immunassays zur Früherkennung von Diabetes mellitus Typ I (IDDM) eingesetzt.</p> |
