氨基化硅胶协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法

摘要

本发明公开了氨基化硅胶协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法。该方法将酱油渣提取物经MPLC纯化，洗脱；将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水放置，分离上相与下相；以上相作为固定相，下相为流动相，制得分离样品溶液；在无水乙醇‐蒸馏水中加入正硅酸酯，调节pH值，反应，加入γ‐氨丙基三乙氧基硅烷，静置陈化，制得γ‐氨丙基硅胶微球；将上相作为固定相，下相为流动相泵入高速逆流色谱仪，注入加有γ‐氨丙基硅胶微球的上相与下相的混合液，进行高速逆流色谱分离，得大豆异黄酮。本发明利用逆流色谱的液液分配及其硅胶微球改性基团吸附的协同作用，改善强极性天然产物的分离效果，有效解决高速逆流色谱中强极性物质分离的难题。

主权项

氨基化硅胶协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)粗提物的制备：将酱油渣提取物经MPLC纯化，以乙醇‐蒸馏水为洗脱液，流速为15‐25mL/min进行梯度洗脱，然后将溶剂减压浓缩，得到大豆异黄酮粗提物，置冰箱保存；所述梯度洗脱是在前15min内，以纯水进行洗脱；以体积百分比计，15‐30min内，洗脱液为20％乙醇‐80％水；30‐45min内，洗脱液为40％乙醇‐60％水；45‐60min内，洗脱液为60％乙醇‐40％水；60‐75min内，以80％乙醇‐20％水进行洗脱；75‐90min内，以95％乙醇‐5％水进行洗脱；(2)样品溶液的制备：将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入到分液漏斗中，充分震荡后放置12‐24小时，将上相与下相分离；按体积份数计，正己烷为100份，乙酸乙酯为150‐200份，甲醇为150‐250份，水为150‐200份；以上相作为固定相，下相为流动相；将100体积份上相与80‐130份下相混合，每毫升上相与下相的混合物中溶解大豆异黄酮粗提物3‐15毫克，制得分离样品溶液；(3)γ‐氨丙基硅胶微球的制备：按体积份数计，在100‐120份无水乙醇‐蒸馏水中加入13‐15份正硅酸酯，调节pH值到7‐9，反应0.5‐1.0h后，再加入2‐3份γ‐氨丙基三乙氧基硅烷，静置陈化24‐48h，制得γ‐氨丙基硅胶微球；无水乙醇与蒸馏水的体积比为3:5‐3:7；(4)高速逆流分离：将上相作为固定相泵入高速逆流色谱仪，将高速逆流色谱仪的多层胶管柱充满；当高速逆流色谱仪稳定运行时，将下相为流动相，将流动相泵入到多层胶管前端；当有15‐25mL的固定相被推出的时候，注入1‐3mL加有γ‐氨丙基硅胶微球的上相与下相的混合液，且每毫升上相与下相的混合物中加入γ‐氨丙基硅胶微球100‐300毫克；当有流动相从多层胶管尾端流出时，将5‐15mL样品溶液从进样口注入，再补充注入10‐20mL固定相，进行高速逆流色谱分离，得大豆异黄酮。