一种蚯蚓中镇痛活性物质的制备方法

摘要

本发明公开了一种蚯蚓中镇痛活性物质的制备方法。本方法以活体蚯蚓为原料，经高渗试剂浸提、低温高速离心、混合纤维素微孔滤膜抽滤、交联葡聚糖凝胶过滤柱层析分离纯化、冷冻干燥后得到具有强镇痛活性的一种生物活性物质。本方法有效富集了蚯蚓中的镇痛活性成分，且活体浸提的方法极大地降低了其他非有效成分的干扰，使该制备工艺具有提取步骤简单、成本低廉、活性成分得率高等特点，适合实验室分析以及大规模生产。

主权项

一种蚯蚓中镇痛活性物质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)粗提液的制备取活体蚯蚓以去离子水清洗3‑5次，使其吐尽泥沙，沥干待用，按每千克蚯蚓50‑150g的量均匀地将高渗试剂洒在蚯蚓体表，静置浸提30‑120min，浸提液10,000‑15,000g、4‑10℃低温高速离心5‑20min后取上清液，以孔径0.45μm、0.3μm或0.22μm的混合纤维素微孔滤膜抽滤，即得镇痛活性物质粗提液；(2)镇痛活性物质的纯化取上述粗提液，上样于交联葡聚糖凝胶层析柱，加流动相进行分离洗脱，紫外检测仪280nm检测，收集特定色谱峰组分，收集液经‑40℃至‑50℃冷冻干燥，即得镇痛活性物质；所述高渗试剂为葡萄糖、硫酸铵或蔗糖；所述流动相为去离子水、0.01M‑0.05M PBS缓冲液或0.01M‑0.05M Tris‑HCl缓冲液。