抗东亚钳蝎蝎毒F(ab’)₂抗体制备及其使用方法

摘要

本发明涉及一种抗东亚钳蝎蝎毒F(ab’)₂抗体制备及其使用方法，本发明的抗体与山西产BMK蝎毒在2:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与辽宁产BMK蝎毒在0.5:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与山东和河南产BMK蝎毒在1:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；免疫扩散测定结果表明与各地产蝎毒质量比在0.4:1时出现清晰免疫沉淀线；本发明以东亚钳蝎蝎毒免疫马获得免疫血浆，经盐析制备IgG再酶解、离子交换柱纯化后得到高纯度的F(ab′)₂活性片段。

主权项

一种抗中国东亚钳蝎蝎毒F(ab’)₂抗体，其特征是，制备方法如下：(1)从至少三个产地获取东亚钳蝎，采集它们的蝎毒，混合后作为免疫原，免疫动物后取动物血液，得到具有特异性IgG的蝎毒免疫血浆，其中三个产地选自山西：山东：河南；(2)取蝎毒免疫血浆，通过硫酸铵分步盐析获得IgG组分；(3)用无菌水补IgG溶液至原血浆体积，HCl调pH值，加入胃蛋白酶酶解IgG后再加入硫酸铵，待完全溶解后于57℃保持15～20min，分离上清液；(4)上清用Sephadex G25树脂色谱柱脱盐，再用1mol/L的Tris‑HCl调节电导率值到2～3ms/cm后，上预先用pH 8.0的0.1mol·L^‑1Tris‑HCl缓冲液平衡好的DEAE‑Sepharose FF柱，上柱后用pH 8.0的0.1mol·L^‑1Tris‑HCl缓冲液淋洗1‑3倍柱床体积，再用0.1mol·L^‑1Tris‑HCl+0.5mol·L^‑1NaCl缓冲液进行线性梯度洗脱，0％→100％，3倍柱床体积，收集穿透峰洗脱液，脱盐过滤冻干即得；其中，所述中国东亚钳蝎蝎毒F(ab’)₂抗体，分子量为：97000～110000Da，其理化性质为：白色或淡黄色疏松体，注射用水或生理盐水溶解后pH值在6.0～7.0之间，能与抗马血清或IgG反应呈阳性，其F(ab’)₂抗体纯度大于85％，IgG含量低于5％，所述抗体具有如下功能：与山西产BMK蝎毒在2:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与辽宁产BMK蝎毒在0.5:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与山东和河南产BMK蝎毒在1:1(M:M)时可保护小鼠100％存活。