一种利用流式细胞术检测人气道胰蛋白酶样蛋白酶4的方法

摘要

本发明公开了一种利用流式细胞术检测人气道胰蛋白酶样蛋白酶4的方法。具体而言，该方法包括下列步骤：1）骨髓或外周血样品采集；2）免疫荧光标记；和3）上流式细胞仪检测。本发明的检测方法既可以使用少量的骨髓细胞作为样品，又可以使用外周血作为样品，极大地减轻了患者在样品采集过程中所承受的痛苦，提高了患者的顺从性。另外，本发明的检测方法中的操作步骤简单、便捷，检测周期短，仅需数小时即可完成检测，极大地缩短了检测周期，有利于加快相关研究的进度，节省了时间成本。

主权项

一种利用流式细胞术检测HATL4的方法，其包括如下步骤：1）样品采集：选取0.1~1 mL骨髓或外周血作为样品；当以骨髓作为样品时，取髂前上棘后上方1~2 cm处作为穿刺点，取样后置于经抗凝化处理的针筒中；当以外周血作为样品时，取肘静脉处作为采血点，取样后置于经抗凝化处理的试管中；2）免疫荧光标记：吸取100 μL已抗凝的样品，置于样品管中，加入CD45‑PerCP、CD13‑PE和HATL4‑FITC各10 μL混匀，并向异常细胞群中加入标志，同时向对照管中加入同型对照，然后于室温避光反应30分钟，再分别加入1 mL溶血剂，混匀后避光溶血15分钟，待完全溶血后，于2000 rpm离心5分钟，弃去上清液后，再用PBS洗涤1遍，于2000 rpm离心5分钟；3）检测：检测前进行三色荧光补偿，检测时用CD45‑PerCP/SSC设门，用于将异常细胞群与正常细胞群分开，将异常细胞群圈出设门后，每份样品捕获分析2×10⁴个细胞，上流式细胞仪检测。