一种通过药物净化和筛选法培育清洁级实验树鼩的方法

摘要

本发明涉及一种通过药物净化和筛选法培育清洁级实验树鼩的方法，属于培育清洁级实验动物技术领域。该方法包括体外寄生虫净化、肠道蠕虫净化、沙门氏菌和志贺氏菌净化、弓形虫筛选、疱疹病毒筛选等步骤。本发明方法简单，利用药物净化与和筛选法相结合，将实验树鼩的微生物和寄生虫等级由普通级净化为清洁级，效果明显。本发明体外寄生虫和肠道蠕虫的净化率达到100%，沙门氏菌和志贺氏菌净化率达到97.5%，同时采用筛选法剔除了弓形虫、疱疹病毒和皮肤病原真菌阳性的个体，建立了一种通过药物净化和筛选法培育清洁级实验树鼩的方法。在国内实属首创，填补了迄今为止国内尚无培育清洁级实验树鼩的空白。

主权项

一种通过药物净化和筛选法培育清洁级实验树鼩的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），体外寄生虫净化：取灭虱精，配制为质量浓度为0.01%的水溶液后，加热至38℃～40℃，抓取并保定树鼩，然后将树鼩除头部外全身浸入灭虱精水溶液中，药浴2～3min，离开灭虱精水溶液，待树鼩的毛发干了后，转入洁净设施中饲养，7天后，再采用上述相同方法进行药浴，待树鼩的毛发擦干后，按照《GB/T 18448.1‑2001 实验动物 体外寄生虫检测方法》的规定进行检测，检测时，用显微镜观察树鼩毛发，见到体外寄生虫卵和/或成虫者，判为阳性；反之判为阴性；将检测结果为阴性的树鼩转入洁净设施中饲养；所述的体外寄生虫为虱、螨或蚤；步骤（2），绦虫和吸虫净化：口服吡喹酮，每天2次，间隔12小时1次，每次剂量为120mg/kg，连续给药2天，然后对树鼩新鲜粪便进行检测，按照《GB/T 18448.6‑2001 实验动物 蠕虫检测方法》的规定进行，显微镜下观察到绦虫的卵、绦虫的成虫、吸虫的卵和吸虫的成虫中的一种或几种时，判为阳性；反之判为阴性；将检测结果为阴性的树鼩转入洁净设施中饲养；步骤（3），线虫净化：皮下注射伊维菌素，剂量为每只动物0.03ml/次，每14天注射1次，共注射3次；然后对树鼩新鲜粪便进行检测，按照《GB/T 18448.6‑2001 实验动物 蠕虫检测方法》的规定进行，显微镜下观察到线虫卵和/或成虫时，判为阳性；反之判为阴性；将检测结果为阴性的树鼩；步骤（4），沙门氏菌和志贺氏菌净化：口服诺氟沙星，每天2次，间隔12小时1次，每次剂量为100mg/kg，连续给药2天，然后取树鼩肛拭子按照《GB/T 14926.1‑2001实验动物 沙门氏菌检测方法》和《GB/T 14926.47‑2008 实验动物 志贺菌检测方法》的规定进行检测，根据生化鉴定结果判定，剔除检测结果为阳性的树鼩，保留检测结果为阴性的树鼩；步骤（5），弓形虫筛选：采集树鼩全血样本，按照《GB/T18448.2‑2008 实验动物 弓形虫检测方法》的规定执行，根据该规定中检测方法检测弓形虫抗原，根据检测结果，剔除检测结果为阳性的树鼩，保留检测结果为阴性的树鼩；步骤（6），疱疹病毒筛选：采集树鼩血液样本，根据实验动物国家标准GB/T 14926.60‑2001 实验动物 猕猴疱疹病毒Ⅰ型(B病毒)检测方法规定，提取DNA进行疱疹病毒的PCR检测，根据检测结果，剔除检测结果为阳性的树鼩，保留检测结果为阴性的树鼩；步骤（7），皮肤病原真菌筛选：采集树鼩毛发和皮屑，分离培养真菌，涂片镜检，按照《GB/T14926.4‑2001实验动物 皮肤病原真菌检测方法》规定进行，根据动物皮肤癣菌的病原真菌形态进行鉴定，剔除检测结果为阳性的树鼩，保留检测结果为阴性的树鼩；步骤（8），清洁级实验树鼩的判定：经步骤（1）‑步骤（7）净化均为阴性的树鼩为清洁级实验树鼩。