一种耐超高温液化淀粉酶的制备方法

摘要

一种基因重组菌发酵生产辅酶Q10的方法, 将NAD激酶基因转入高效表达还原性辅酶Q10的菌株；所述的重组菌优化的培养条件为：（1）斜面活化；（2）种子培养；（3）发酵培养。本发明通过基因工程手段构建的重组菌，稳定性强，其辅酶Q10产量较出发菌株提高了21.6%，达到1.63g/L，能够达到工业生产的要求。

主权项

一种耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步聚1，琼脂培养基接种培养：（1）琼脂培养基准备，培养基配方：胰蛋白胨1.2g，酵母膏0.6g，NaCl 1.0g，琼脂2.0g，可溶性淀粉0.28g, pH6.8，其余为水，合计总重100g；将所述100g配料混匀后，分放于培养皿中，0.1MPa灭菌33min，冷却至室温，制成琼脂复壮培养基,备用；（2）接种与培养：将实验室保存的地衣芽孢杆菌环移取1环放于每个培养皿的琼脂培养基上，置于36℃±1℃恒温培养65h，取出保存，制成琼脂培养基菌种；步聚2，扩大培养：（1）扩大培养基配方：胰蛋白胨60g，酵母膏30g，NaC1 50g，可溶性淀粉14g，水4846g，合计总重5000g，pH6.8；0.1MPa灭菌33min，冷却至40℃，制成扩大培养基，备用；（2）扩大培养方法：取步聚1制成的琼脂培养基菌种，按扩大培养基重0.8%的接种量，接种到冷却至40℃的扩大培养基，36℃±1℃恒温培养65小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为310转/分钟，通风量为1.4立方气体/升扩大培养基/分钟，制成扩大培养液；步聚3，液态发酵制备：（1）液态发酵培养基配方：(NH₄)S0₄ 0.25 kg，KH₂PO₄ 0.34kg，CaC1₂ 0.018kg，可溶性淀粉0.28kg，胰蛋白胨0.40 kg,玉米粉3.20kg，水95.512kg，pH6.8，合计总重100kg，0.1MPa灭菌33min，冷却至40℃，制成液态发酵培养基，备用；(2)液态发酵培养：取步聚2制成的扩大培养液，按相当于液态发酵培养基重3.0%的接种量，接种到冷却至40℃的所述液态发酵培养基，36℃±1℃恒温培养65小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为330转/分钟，通风量为1.4立方气体/升培养基/分钟，制成液态发酵液；步聚4，粗滤：往步聚3制成的液态发酵液中添加相当于液态发酵液重4‑6%的硅藻土，混合均匀，板框压滤，得粗滤液；步聚5，膜浓缩：以微滤膜将步聚4所得粗滤液过滤浓缩至原粗滤液的1/5，经膜浓缩后，将浓缩液以塑料桶装，在室温5‑25℃下保存即可。