一种紫芽茶树R2R3-MYB（CsMYB6A）基因克隆及载体构建方法以及应用

摘要

本发明公开了一种紫芽茶树R2R3-MYB(CsMYB6A)基因克隆及载体构建方法以及应用，具体涉及一种紫芽茶树DNA片段的分离、克隆、功能验证及应用，该基因调控花青素合成，能够改变植物叶片的颜色，提高植物花青色的含量，将该基因转化到烟草中，能使转基因烟草叶片变红，花青素含量明显增加。

主权项

一种紫芽茶树R2R3‑MYB(CsMYB6A)基因克隆及载体构建方法，其特征在于，步骤包括：(1)设计特异引物CsMYB6A‑F：ATGGACATTGTTTGTTGT；CsMYB6A‑R：TCATTCATCACCTAACAGATCCC；CsMYB6A‑attb‑F：GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCCACCATGGACATTGTTTGTTGT；CsMYB6A‑attb‑R：GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTCATTCATCACCTAACAGATCCC；以茶树cDNA为模板，将attB1接头序列加至CsMYB6A基因上游引物的5′端，将attB2接头序列加至CsMYB6A基因下游引物的5′端；(2)以测序正确的带有CsMYB6A基因的质粒为模板进行高保真PCR，回收带有attB接头序列的目的基因产物；(3)进行BP反应，水浴后转化至Trans‑T1感受态，涂布含有庆大霉素的LB固体培养基上；(4)测序正确后提取质粒进行LR反应；(5)测序正确后抽提质粒pGWB5‑CsMYB6A‑GFP，然后利用电转法将该载体转入根癌农杆菌EHA105，在含有壮观霉素和卡那霉素的LB固体培养基上进行筛选，倒置培养，利用菌落PCR鉴定阳性克隆。