| 发明名称 | 一种克隆植物病毒基因组特定序列的方法 | ||
| 摘要 | 本发明公开了一种克隆马铃薯病毒基因组特定序列的方法：(1)设计马铃薯病毒特定序列引物；(2)利用特定研磨缓冲液研磨马铃薯叶片；(3)包被；(4)反转录；(5)目的片段的PCR扩增；(6)电泳检测，与现有技术相比，该方法分为离心管与病毒颗粒的非特异性结合和反转录PCR两个部分，既避开了RNA的提取和抗体制备过程，降低了成本，又继承了现有方法简单、快速、灵敏度高等优点，试验证明本发明的灵敏度高，重复性好，可行性强，有很好的应用前景。 | ||
| 申请公布号 | CN101457221A | 申请公布日期 | 2009.06.17 |
| 申请号 | CN200810306720.5 | 申请日期 | 2008.12.31 |
| 申请人 | 贵州省植物保护研究所 | 发明人 | 邱又彬;陶刚;李奇科;刘作易;黄永会;朱英;郑世玲 |
| 分类号 | C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/70(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I | 主分类号 | C12N15/10(2006.01)I |
| 代理机构 | 贵阳中新专利商标事务所 | 代理人 | 程新敏 |
| 主权项 | 【权利要求1】一种克隆植物病毒基因组特定序列的方法，其特征在于：(1)设计植物病毒基因组特定序列的特异性引物；(2)研磨：将植物病害叶片和研磨缓冲液以0.2～1g/1ml的比例放入研钵中，研磨成叶汁匀浆，吸入离心管中离心；其中，研磨缓冲液为：在100ml pH为7.2的0.02mol/L磷酸缓冲液中加入1～3g聚乙烯吡咯烷酮；(3)包被：吸取离心后的上清液于离心管中，35～39℃水浴2.5～3.5小时，移去病叶汁，用PBST溶液清洗3次，DEPC水洗一次，离心后吸去管底余液；其中，PBST溶液的配方为：在100ml pH为7.5的0.01mol/L磷酸缓冲液中加入0.03～0.07ml Tween—20；(4)反转录：配制20μl反转录体系，42℃反转录1h，将反应管转至90℃水浴15min，即得cDNA；(5)目的片段PCR扩增：用得到的cDNA配制25μl PCR反应体系，进行目的片段的PCR扩增；(6)电泳检测：琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。 | ||
| 地址 | 550006贵州省贵阳市小河区金农社区 | ||