小麦线条花叶病毒的环介导等温扩增检测引物组、检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种小麦线条花叶病毒的环介导等温扩增检测引物组、检测试剂盒及检测方法，特点是LAMP的两对引物如下WSMV1‑F3、WSMV1‑‑B3、WSMV1‑FIP、WSMV1‑BIP，其RT‑LAMP反应体系如下：2μL WSMV1‑FIP溶液，2μL WSMV1‑BIP溶液，0.25μL WSMV1‑F3溶液，0.25μL WSMV1‑B3溶液，12.5μL 2×反应缓冲液，1μL Bst DNA聚合酶和AMV逆转录聚合酶组成的聚合酶混合液，1μL钙黄绿素，2.5μL RNA模板，无Rnase的水补至25μL，检测方法包括总RNA的提取；RT‑LAMP引物的设计和合成；配制RT‑LAMP反应体系；WSMV的RT‑LAMP目视检测，优点是灵敏度高，特异性强且简便快速。

主权项

一种小麦线条花叶病毒的环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于：该检测试剂盒包括2×反应缓冲液，由Bst DNA聚合酶和AMV逆转录聚合酶组成的聚合酶混合液，浓度均为20μmol/L的内侧上游引物溶液、内侧下游引物溶液、外侧上游引物溶液和外侧下游引物溶液，钙黄绿素荧光染料，所述的2×反应缓冲液、所述的聚合酶混合液、所述的内侧上游引物溶液、所述的内侧下游引物溶液、所述的外侧上游引物溶液、所述的外侧下游引物溶液、所述的钙黄绿素荧光染料的体积比为12.5：1：2：2：0.25：0.25：1，引物序列为外侧上游引物WSMV1‑F3：5’‑acaaaggccatatacatgcc‑3’；外侧下游引物WSMV1‑B3：5’‑gcttcgcagctttgtacatt‑3’；内侧上游引物WSMV1‑FIP：5’‑tgttaagttgctcagttgtttaaagcctgaaatgataaata‑3’；内侧下游引物WSMV1‑BIP：5’‑cactgcataatcaacacaactaaactcgagttgctgctca‑3’，其中所述的反应缓冲液的配方如下：40mM的pH8.8的Tris‑HCl、20mM的KCl、16mM的MgSO₄、20mM的(NH₄)₂SO₄、0.2％的Tween20、1.6M的甜菜碱和每种2.8mM的dNTP_S，所述的聚合酶混合液中Bst DNA聚合酶和AMV逆转录聚合酶的浓度均为8U/μL。