一种用于免疫学分析的蛋白质芯片的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于免疫学分析的新型蛋白质芯片。在洁净的玻璃基片上镀一层金属膜后用甩胶机在上面涂一层光敏胶。将具有图案的光刻掩模盖在基片上，在紫外光刻机下光刻，显影定影后得到微图案。再将露出的金属图案腐蚀掉，露出玻璃图案。去胶后，修饰露出的玻璃图案，使其具有活性功能基团——氨基。去掉剩余的金属膜并清洗晾干后，将抗原蛋白溶液覆盖于基片表面，蛋白质与氨基作用后通过化学键连接于载玻片上而被固定。利用荧光标记物对蛋白质样品分子进行标记，最后利用芯片荧光显微分析系统对蛋白质样品进行检测分析。本发明是灵敏度和特异性都较高的生物化学型蛋白质芯片，制作方法简便、适合于批量生产，并且可以对多种蛋白质样品进行检测分析。

主权项

1、一种用于免疫学分析的蛋白质芯片的制作工艺，在玻璃基片上具有基底图案，基底图案带有氨基，蛋白质样品与氨基作用后通过化学键连接于载玻片上而被固定，蛋白质样品成微阵列；利用荧光标记物对蛋白质样品分子进行标记，最后利用芯片荧光显微镜对蛋白质样品进行检测分析，其特征在于它是采取如下步骤：1)在洁净的载玻片表面镀一层厚150-250nm的铬膜或铝膜，然后在上面用高速旋转的甩胶机涂覆一层500-700nm厚的正型光刻胶；2)在60-80℃下烘干坚膜30-60min，使光胶与金属膜紧密结合；3)通过微电子学中制作电路板的技术制作的具有微阵列图案的光刻掩模；或者事先设计并打印出微阵列图案，通过翻拍技术制得照相底片，以其作为光刻掩模；4)将光刻掩模盖在涂胶的玻片上面，在紫外光刻机下光刻；5)用0.5-1％的NaOH溶液显影，去掉曝光图案部分的光刻胶，露出金属基底图案；6)用硝酸铈铵溶液腐蚀掉露出的铬层或对铝膜用1.6mol/L的磷酸溶液腐蚀，得到玻璃图案；用1-10％的NaOH溶液去掉剩余的光刻胶；7)将玻璃片用体积比1∶1∶5的25％NH3，30％H2O2和H2O溶液清洗；然后用体积比1∶1∶5为37％HCl，30％H2O2和H2O溶液处理5-10分钟；对镀铝的玻璃片则改用30％的H2O2处理；再将其分别用水，酒精和丙酮清洗，使其在空气下干燥后再置于100-120℃的烘箱内干燥0.5-1小时；8)将玻璃片用1-5％的3-胺基-丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的甲苯溶液修饰3-10分钟，再用甲苯及丙酮清洗之，然后在100-120℃下干燥0.5-1小时，使玻璃片表面带上氨基；9)用硝酸铈铵腐蚀液腐蚀掉剩余的铬层；或用磷酸溶液腐蚀铝膜；并用双蒸水进行充分的清洗后晾干；10)将配好的抗原加到经过修饰的玻璃基片表面，使蛋白质与表面的氨基作用10-30分钟，通过化学键连接于载玻片上而被固定；然后用pH值在7.2-7.4之间磷酸盐缓冲液：0.2mol/L的Na2HPO481.0mL，0.2mol/L的NaH2PO419.0mL混合和双蒸水分别冲洗基片表面，洗掉多余的抗原后晾干。