检测人类免疫缺陷病毒的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及检测临床样品中艾滋病的病原体人类免疫缺陷病毒(HIV)I型(HIV－1)存在的方法及试剂盒，特别是涉及以实时定量荧光聚合酶链反应技术早期诊断HIV－1感染的方法及所使用的试剂盒。

主权项

1.一种使用实时荧光定量聚合酶链反应技术定量检测样品中HIV-1病毒存在的方法，该方法包括：(1)提供包括样品、包括耐热DNA聚合酶、2’-脱氧核苷三磷酸、能够与双链靶多核苷酸的第一条链结合的正向引物和能够与双链靶多核苷酸的第二条链结合的反向引物的核酸扩增体系，以及荧光监测体系的反应与检测混合物，(2)通过扩增反应循环扩增所说的靶多核苷酸，(3)使所说的荧光发生基团与被扩增的靶多核苷酸间接结合，(4)确定荧光发生基团所产生的荧光量，(5)分析扩增循环后产生的荧光量以确定靶多核苷酸的存在及其相对量；其中核酸扩增系统包括可与靶多核苷酸结合的寡核苷酸引物，并且荧光监测系统包括可与靶多核苷酸结合的寡核苷酸探针；特征在于所使用的是套式PCR，核酸扩增体系中正向和反向寡核苷酸外引物分别是5’-GTT AAG GCC GCC TGT TGG T-3’(SEQ ID NO：1)和5’-TACTAT TCT TTC CCC TGC ACT G-3’(SEQ ID NO：2)，正向和反向寡核苷酸内引物分别是5’-CAATCC CCA AAG TCA AGG AGT-3(SEQ ID NO：3)’和5’-CCT GCA CTG TAC CCC CCA ATC C-3’(SEQ ID NO：4)并且其荧光监测体系中所使用的寡核苷酸探针是5’-ACAGC AGTAC AAATG GCAGTATTCA TTCAC-3’(SEQ ID NO：5)。