用PVP/CdS量子点修饰电极实现蛋白质分离检测的方法

摘要

一种用PVP/CdS量子点修饰电极实现蛋白质分离检测的方法，属于纳米修饰电极和生物检测的技术领域。该方法需在含蛋白质色谱柱的高效液相色谱(HPLC)与工作电极为PVP/CdS量子点修饰电极的电化学检测器(ECD)组成的HPLC-ECD体系内实施，用HPLC技术分离蛋白质，HPLC泵驱动流经蛋白质色谱柱的流动相和待测液直接进入ECD，PVP/CdS量子点修饰电极对分离的蛋白质进行电化学检测。该方法有灵敏度高、稳定性好、成本低廉、能实现对蛋白质的电化学检测等优点。

主权项

1、一种用PVP/CdS量子点修饰电极实现蛋白质分离检测的方法，其特征在于，需在含蛋白质色谱柱的高效液相色谱即HPLC与工作电极(1)为PVP/CdS量子点修饰电极的电化学检测器即ECD组成的HPLC-ECD体系内实施，其操作步骤如下：第一步流动相溶液的配置流动相A液为含0.1％三氟乙酸即TFA的乙腈，B液为含0.1％TFA的水，将配好的流动相溶液分别放入流动相贮液瓶A和B中；第二步HPLC-ECD体系的运行在选定的蛋白质色谱柱条件下，启动HPLC泵，流动相的流速在1.0～5.0mL/min的范围内调节，流动相的梯度在20％～60％A梯度范围内以2％/min～10％/min的速度变化，通过计算机启动并控制电化学工作站在ECD上施加电压为-0.2～-0.4V的工作电位，计算机实时记录流动相在ECD上的电流响应情况，预运行10～15min后体系达到稳定状态：流动相流速恒定、蛋白质色谱柱柱压稳定、薄层ECD电化学响应i-t基线稳定，所述的电化学工作站是CHI832电化学分析仪；第三步蛋白质的分离检测的定标用多种蛋白质以每次一种的方式对所述的HPLC-ECD体系进行定标，分别配置一种蛋白质一系列标准浓度为1.0×10-8mol/L～1.0×10-4mol/L的样品溶液，每次进标准样品溶液20μL，由计算机实时记录出峰时间及响应电流，用于定标的蛋白质与待测蛋白质的混合样品中待测蛋白质相对应，因蛋白质而异的出峰时间是相应的蛋白质在所确定的分离条件下的定性分析标准，按同种蛋白质不同浓度及其相应的响应电流值绘制的浓度-电流工作曲线是确定该蛋白质的浓度的定量分析标准；第四步蛋白质的分离检测进20μL待测蛋白质的混合样品，由计算机实时记录色谱峰的出峰时间及响应电流值，通过将测得的色谱峰的出峰时间与第三步所得的标准出峰时间对比，确定与该色谱峰对应的待测蛋白质的种类；通过将测得的响应电流值与第三步所得的工作曲线对比，确定与该响应电流值对应的待测蛋白质的浓度。