发明名称 |
一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法 |
摘要 |
本发明公开了一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法,包括以下步骤:a)孢子悬浮液制备:取恒温培养箱内的平板孢子,震荡后用无菌蒸馏水稀释,即得孢子悬浮液并备用;b)复合60Co‑γ与等离子体诱变:制取该菌株的孢子悬浮液,进行等离子体离子束注入,置于剂量0.5~2.0 KGy的辐照台面上,吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4%的干酪素培养基上;c)菌株筛选:c1)将干酪素培养基在35℃避光恒温培养2~4 d,挑选其中HC值大于平均值的变异菌株,接入分离培养基斜面保存备用;c2)取步骤c1)得到的菌株,加入1 mL 2%的硫代硫酸钠作为解毒剂,培养基中30℃培养2d,选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。 |
申请公布号 |
CN105861483A |
申请公布日期 |
2016.08.17 |
申请号 |
CN201610351277.8 |
申请日期 |
2016.05.25 |
申请人 |
浙江工业大学 |
发明人 |
何荣军;王茜;孙培龙 |
分类号 |
C12N13/00(2006.01)I;C12N1/02(2006.01)I |
主分类号 |
C12N13/00(2006.01)I |
代理机构 |
杭州之江专利事务所(普通合伙) 33216 |
代理人 |
朱枫 |
主权项 |
一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法,其特征在于:包括以下步骤:a)孢子悬浮液制备:取恒温培养箱内40℃下培养5 d的平板孢子,用无菌蒸馏水洗脱平板孢子,置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中,在250~300 r/min的震荡装置上震荡2~5 h,使孢子活化和分散,使孢子分散率在90% 以上,在光学显微镜下观察孢子并计数,然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至115 个/mL,即得孢子悬浮液并备用;b)复合60Co‑γ与等离子体诱变:洗脱麦芽汁琼脂平板培养基上的孢子,制取该菌株<img file="dest_path_image002.GIF" wi="23" he="18" />个/mL的孢子悬浮液,移液管移取0.2 mL悬液至无菌空平皿,涂匀,以无菌风吹干,计算损耗率;进行等离子体离子束注入,以<img file="dest_path_image004.GIF" wi="16" he="17" />为注入离子,注入电压为10KV~25KV,注入剂量分别为(15~75)×2.6×<img file="dest_path_image006.GIF" wi="27" he="18" /><img file="dest_path_image008.GIF" wi="74" he="20" />;然后将盛有菌体悬液的试管置于剂量0.5~2.0 KGy的辐照台面上,涂布培养72 h,吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4% 的干酪素培养基上;c)菌株筛选:c1) 将步骤b)的干酪素培养基在35℃避光恒温培养2~4 d,挑选其中HC值大于平均值的变异菌株,接入分离培养基斜面保存备用;HC值=透明圈直径/菌落直径;c2) 取步骤c1)得到的菌株,加入 1 mL 2 %的硫代硫酸钠作为解毒剂,培养基中 30℃培养 2d,然后利用福林酚法检测中性蛋白酶酶活力,选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。 |
地址 |
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