| 主权项 |
1.一种细胞质DNA的提取方法，包括(1)从人体或动物体的细胞组织获得单细胞，或从人体或动物体的外周血中获得外周白细胞的步骤，其特征在于还有下列步骤：(2)细胞、线粒体的裂解及DNA的变形与复性向装有细胞的离心管中加入溶液A，所加入溶液A的量按每107个细胞加140～160μl计，在冰浴中吹吸均匀，然后加入溶液B，加入溶液B的量按每107 个细胞加290～310μl计，颠倒混匀，然后放在冰浴中5～10分钟，再加入溶液C，加入溶液C的量按每107个细胞加215～235μl计，再混匀，然后放在冰浴中20～30分钟；上述溶液A中各溶质及其浓度为：葡萄糖55mmol/L，EDTANa2.2H2O50mmol/L，Tris-HCl 0.025mmol/L；上述溶液B中各溶质及其浓度为：SDS 1％，NaOH 0.2mol/L；上述溶液C中各溶质及其浓度为：钾离子3mol/L，乙酸根离子5mol/L；(3)细胞质DNA的提取将复性完毕的溶液离心，取上清液，再加入上清液1/2体积的Tris饱和酚，振荡混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿-异戊醇，氯仿与异戊醇的体积比为24∶1，再振荡混匀，然后离心，取上层水相；(4)细胞质DNA的纯化加入所取上层水相等体积的异丙醇，冰浴25～40分钟，离心，弃上层水相，用0℃65％～75％乙醇洗涤沉淀，离心，弃上清层，沉淀干燥后得细胞质DNA。 |
