一种用靶向探针技术检测高血脂血清的方法

摘要

一种用靶向探针技术检测高血脂血清的方法：靶向探针是通过探针包被物与血清中脂蛋白胆固醇酯之间在高盐的介导实现的，疏水相互作用，探针与脂蛋白胆固醇酯的特异性结合完成的。之后在系列酶的作用下，酶促反应终产物的显色反应，呈色的深度显示血脂的含量。本检测分湿法及干法两种，干法为半定量法适于家用，亦可为临床治疗手段提供证据。湿法为微量定量法，适于临床化验用。

主权项

1、一种用靶向探针技术检测高血脂血清的方法，其特征在于所 述方法包括：靶向探针的制备、低密度脂蛋白沉淀片、高密度脂蛋白 沉淀片、红血球过滤片选择、测试板的组装等； 1)在每平方厘米测定板加入31μl-100μl试剂，此试剂为下述 成份的混合液， 磷酸盐维持pH为7.70.04-0.09μmoL 4氨基安替比林0.07-0.20μmoL 胆酸钠盐0.42-0.93μmoL 酚(重蒸的)0.49-1.09μmoL 胆固醇脂肪酶0.1160-0.2480I、U 胆固醇氧化酶0.0558-0.1240I、U 过氧化物酶0.6975-1.5500I、U 将上述探针内含物与麦醇溶蛋白以E_1cm^280nm·1％为近似于0.7的 浓度按(3-1)∶(0.01-3)的比例在4-8℃温度下逐滴混合，然后在4-8℃ 温度下用200γpm转速搅拌20分钟，完成靶向探针的制备；取出上述 靶向探针物质将其均匀的铺到测定板或纸片上冷冻干燥，完成固相制 备； 2)低密度脂蛋白沉淀片的制备： 在每平方厘米纸片上加入5μlPVS(PolyVinylphyrolidone Solution)(PVP与磷酸盐缓冲液PBS混合沉淀剂)在-10℃—-20℃冷冻 干燥； 3)高密度脂蛋白沉淀片的制备： 在每平方厘米的纸片上加入10μlPTA(phosphotungsticacid) 和Mg⁺⁺混合物，在-10℃—-20℃下冷冻干燥； 4)红血球过滤片的选择： 采用国产微孔滤膜孔径在0.30-0.80μ做为血清透过膜； 5)测试板的组装： 分别将低密度脂蛋白或高密度脂蛋白的沉淀纸片上各盖一个0.3 -0.8μ直径的微孔滤膜，做为除掉低、高密度脂蛋白的及红血球的 血清的装置；然后定量量取经上述装置处理过的血清放入在靶向探针 测试板上温育37℃5分钟；将上述温育后的血清于420-500nm滤光片 下进行比色测定，测定后与标准样品进行比较确定血样中脂蛋白胆固 醇的含量。