通过同源重组在人细胞中生产人突变蛋白

摘要

本发明涉及一种通过同源重组在真核细胞中生产真核多肽的突变蛋白的方法。本发明另外还涉及一种生产人细胞的方法,所述人细胞适合生产人突变蛋白。最后,本发明涉及通过所述方法生产的人细胞和可从其获得的突变的人蛋白质以及含这些突变蛋白的药物制剂。

主权项

1.生产真核多肽的突变蛋白的方法，其中(i)将一种能同源重组的核酸分子引入含编码内源性靶多肽的靶核酸序列的真核细胞，所述核酸分子包括：(a)至少一段序列片段，该序列片段与所述靶核酸序列的基因座中的序列是同源的，并且，与所述内源性靶核酸序列相比，在成熟靶多肽的编码区具有突变，以及(b)一段编码选择标记的核酸片段，(ii)将所述细胞在使得被引入的核酸分子发生同源重组的条件下培养，于是在同源重组后该细胞含有能表达靶多肽的突变蛋白的突变靶核酸序列，(iii)选择在其中发生了同源重组的细胞，以及(iv)从所述细胞或/和细胞上清液分离突变蛋白。