| 摘要 |
Способ определения окислительной модификации фибриногена плазмы крови по содержанию карбонильных групп в фибриновом сгустке, включающий добавку к 1 мл цитратной плазмы крови исследуемой пробы активатора свертывания, инкубацию при 37°C, выделение сгустка фибрина, высушивание его на бумажном фильтре, пересчет на концентрацию фибриногена в мг/мл, обработку исследуемой пробы 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУ) и раствором 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М HCl, инкубацию при комнатной температуре в течение 1 ч, центрифугирование, трехкратное промывание осадка раствором этанола и этилацетата, взятых в соотношении 1:1, высушивание осадка, его растворение в 2,5 мл 8 М мочевины с последующей оценкой окислительной модификации белков по уровню образовавшихся динитрофенилгидразонов с помощью спектрофотометрической регистрации оптической плотности, отличающийся тем, что для активации свертывания плазмы используют тромбин, фибриновый сгусток перед высушиванием на фильтровальной бумаге трижды промывают 0,9%-ным раствором NaCl, затем переводят в растворимое состояние путем гидролиза в 1 мл 1 М раствора NaOH при 100°C, реакцию останавливают через 120±1 с добавлением 1 мл 2 М HCl, пробирки охлаждают, в гидролизате определяют концентрацию белка по биуретовой реакции, пересчитывают на концентрацию фибриногена в мг/мл по калибровке фибриногеном, обработку 20%-ным раствором ТХУ проводят через 1 ч после начала инкубации 0,5 мл гидролизата фибринового сгустка с 2 мл 0,01 М раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М HCl, при этом охлажденный раствор ТХУ добавляют к указанной реакционной смеси в объемном соотношении 8:5 и выдерживают при -20°C не менее 10 минут перед центрифугированием, трехкратное промыв |
