结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法，根据不同分枝杆菌属和结核分枝杆菌复合群16S核糖体核糖核酸(简称rRNA)而设计、合成相应的寡核苷酸探针，通过点样法将寡核苷酸探针按一定的顺序点在经预处理的硝酸纤维膜上，制成耐药基因检测鉴定膜片，与带生物素标记的PCR扩增产物杂交。利用本发明，根据探针杂交的蓝紫色信号强弱用肉眼判读结果，可用于检测临床标本或临床分离株中结核分枝杆菌五种抗结核药物耐药基因。

主权项

1、一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，含有结核分枝杆菌耐药基因检测膜片和结核分枝杆菌耐药基因PCR扩增试剂，其特征在于：所述结核分枝杆菌耐药基因检测膜片是在硝酸纤维膜上固定2个针对分枝杆菌属和结核分枝杆菌复合群16S核糖体核糖核酸而设计的寡聚核苷酸探针，以及一系列针对结核分枝杆菌耐药基因rpoB、katG、embB、rpsL和rrs而设计的寡聚核苷酸探针，在3’末端加有80-110个脱氧核糖核酸；所述的结核分枝杆菌耐药基因多重PCR扩增试剂包括5-10倍PCR缓冲液，浓度各为2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，浓度各为2.5-12.5μmol/L的5’端带生物素标记的分枝杆菌16S rRNA、rpoB、katG、embB、rpsL和rrs基因的上游引物和不带标记的下游引物以及1-10U/μl Taq DNA聚合酶；所述结核分枝杆菌耐药基因多重PCR扩增试剂各组分的终浓度如下：1倍PCR缓冲液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的终浓度各为0.2mmol/L，5’端带生物素标记的分枝杆菌16S rRNA、结核分枝杆菌rpoB、katG、embB、rpsL和rrs基因的上游引物和不带标记的下游引物的终浓度各为0.2-1.0umol/L，TaqDNA聚合酶2-5U/100μl。