一种从产聚唾液酸大肠杆菌发酵液中提取聚唾液酸的方法

摘要

一种从产聚唾液酸大肠杆菌发酵液中提取聚唾液酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以一株大肠杆菌产聚唾液酸的发酵液为原料，经过离心去除菌体，上清液浓缩，加入过量乙醇沉淀出聚唾液酸，聚唾液酸沉淀用去离子水溶解，离心去除蛋白质，上清液经过阳离子交换树脂脱色，用氯仿脱微量蛋白质，透析，冷冻干燥得到聚唾液酸产品。本发明提出一种快速简洁的聚唾液酸提取方法，得到93％纯度的聚唾液酸产品，以用于药品和化妆品的开发需要。

主权项

1.一种从产聚唾液酸大肠杆菌发酵液中提取聚唾液酸的方法，其特征是一株大肠杆菌(Escherichia coli)K235-JY II-74的发酵液为原料，经过离心去除菌体，上清液浓缩，加入过量乙醇沉淀出聚唾液酸，聚唾液酸沉淀用去离子水溶解，离心去除蛋白质，上清液经过阳离子交换树脂脱色、用氯仿振荡脱微量蛋白质，透析，冷冻干燥得聚唾液酸产品；(1)离心去除菌体：发酵液经过3000～8000r/min，离心10～30min；(2)上清液浓缩：离心去除菌体后的上清液经真空浓缩或者超滤浓缩至原发酵液体积的1/2～1/4；(3)加过量乙醇沉淀聚唾液酸：去除菌体后的上清浓缩液加入3～5倍体积95％质量浓度的乙醇，pH4.0～6.0，60～80℃恒温1～2小时，隔夜静置，进行沉淀处理，沉淀处理液过滤或者离心获得聚唾液酸沉淀，再用2～4倍体积的75％质量浓度的乙醇洗涤沉淀2～4次；(4)聚唾液酸沉淀用去离子水溶解，再离心去除蛋白质，离心工艺为15000～20000r/min，离心10～30min；(5)将去蛋白质后的含聚唾液酸的上清液经过采用732阳离子树脂吸附脱色，再用2倍体积去离子水洗脱，洗脱液再用1/4体积的氯仿振荡，分层去除微量蛋白质；(6)透析：脱色脱微量蛋白质后的聚唾液酸采用截留分子量为12000-14000Da的透析膜透析48～72小时，透析后冷冻干燥得聚唾液酸产品。