翦股颖上两种腥黑粉菌近似种的分子检测方法

摘要

本发明涉及利用PCR引物技术检测禾本科草种翦股颖(Agrostis spp L.)中翦股颖腥黑粉菌[Tilletia sphaerococca(Wallr)Waldh]和小麦网腥黑穗菌(T.caries，简称TCT)的方法，属于禾本科草种腥黑粉菌检测领域。本发明设计了5套PCR引物，通用外套引物、通用内套引物、T.sphaerococca的外套引物和特异引物、TCT的特异引物。通用内套引物用于Tilletia属冬孢子的套式扩增，以便对扩增过程进行质量监测，避免假阴性。T.sphaerococca的特异引物和T.caries的特异引物用于菌丝基因组DNA双重特异PCR扩增，各自的外套引物和特异引物，用于双重套式PCR检测两种冬孢子。该方法检测快速、可靠，整个检测过程在一个工作日内完成。

主权项

1.一种利用PCR引物对翦股颖(Agrostis spp L.)中翦股颖腥黑粉菌(Tilletia sphaerococca)和小麦网腥黑穗菌(T.caries，简称TCT)进行检测的方法，其特征在于，设计了一系列引物如下：(1)Tilletia属通用引物，序列如下：通用外套引物：IGSUF1：GGA TGC ATT CTG GGG ACG T IGSUR1：GTA GCC TTG TTG CTA CGA TCT G通用内套引物：NIGSUF1：CAC CGC CCA AGC ACG TAC NIGSUR1：GAC CTT TTG GGG TCA AAC TTC TC这两套引物用于扩增过程质量监测，检查所抽提的菌丝基因组DNA质量和冬孢子的挑取和破碎，避免检测过程中的假阴性；(2)T.sphaerococca和TCT各自的特异引物以及T.sphaerococca的外套引物，序列如下：T.sphaerococca外套引物：IGSUF2：GAG CGA TAC CTT TGC ATT CTG ACG T IGSUR2：CAC TGC ATT CTG GGG ACG TACT.sphaerococca特异引物：ASSF：CTC TGC ATT CTG GGG ACG GTC A ASSR：TTC CAT TGC ATT CTG GGG GG这两套引物用于T.sphaerococca的菌丝基因组DNA特异PCR和冬孢子套式PCR的扩增；TCT的外套引物：IGSUF1/IGSUR1TCT的特异引物：ASTF：TGC ATT CTG GGG ACG ATC ATC CTG ASTR：TCT CTT TGC ATT CTG GGG ACG G这两套引物用于TCT的菌丝基因组DNA特异PCR和冬孢子套式PCR的扩增；T.sphaerococca的特异引物和TCT的特异引物，可用于菌丝基因组DNA双重特异PCR扩增，各自的外套引物与特异引物双重套式PCR特异扩增冬孢子DNA。