一种龙脑樟组织培养快速繁育方法

摘要

本发明公开了一种龙脑樟组织培养快速繁育方法，本方法包括外植体消毒杀菌、不定芽诱导、增殖继代培养、生根培养以及炼苗移栽，并对各步骤具体参数进行改进，同时对不定芽诱导培养基、增殖继代培养基、生根培养基成分及参数进行优化，本发明通过植物组织培养方法短时间内获得大量优质龙脑樟种苗的方法。以龙脑樟萌发芽为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖继代培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一套完善的龙脑樟组织培养快速繁育方法，为满足对龙脑樟优质种苗的需求、加速龙脑樟良种的推广具有重要的现实意义，同时该套方法相较于其他的培养方法再生率高、出芽多，植株移栽成活率可达到90％以上。

主权项

一种龙脑樟组织培养快速繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)剪取龙脑樟单株的萌发芽做为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗后，移置于超净工作台上；在75％乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分待用；(2)将步骤(1)处理后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，先在25‑28℃条件下全暗培养1‑3天，然后置于每天光照10‑12小时，光照强度为1500‑3000lx，直至诱导形成不定芽；所述不定芽诱导培养基包括：MS培养基、6‑BA0.5‑1.0mg/L、NAA0.1‑0.5mg/L、谷氨酰胺0.5‑1.0mg/L、DA‑60.02‑0.05mg/L、琼脂5.0g/L、蔗糖30g/L；(3)将步骤(2)培养的外植体的愈伤组织上的不定芽长至约2‑3cm时切下，并接种至增殖继代培养基上进行增殖继代培养，接种后先在25‑28℃条件下全暗培养3‑5天，然后置于每天光照10‑13小时，光照强度为3500‑4500lx，置于培养温度为25‑28℃的条件下培养2‑3周后，龙脑樟的组培苗开始形成，每25‑35天继代转管一次，继代5次生成生长健壮的试管苗；(4)生根培养：将步骤(3)过程获得的高度约为3.5‑5.5cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25‑28℃条件下全暗培养3‑7天，然后置于每天光照12‑15小时，光照强度为1500‑2500lx，培养温度为25‑28℃的条件下培养20天左右即开始生根；(5)炼苗移栽：将步骤(4)获得的高约5‑7cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根组培苗置于自然光照下炼苗3‑5天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡8‑10s，栽入由草炭土∶沙土＝3∶1混合成的基质，保持湿度并给予60‑80％的遮阴处理；移栽时选择室外最高气温稳定达到18℃以上时移栽，移栽后每天进行叶片喷施清水，早中晚各1次，促进其进一步生长，同时要避免因根部过长而在移栽过程中受伤。