| 主权项 |
1.一种制备包含一具抗肿瘤与免疫调节功能的灵 芝多醣体之萃取物的方法,其系包括: (1)将灵芝(Ganoderma lucidum)的植物组织均质; (2)使用一硷性水溶液介质萃取上述经均质的该植 物组织以获得一粗萃取物; (3)将该粗萃取物以胶体过滤层析法处理,并以一pH 値约为7之硷性缓冲液冲提,以形成复数个分馏物( fraction);以及 (4)以逆转录聚合链反应(RT-PCR)分析法,自步骤(3) 该复数个分馏物中选出能提升调控(up-regulated)老 鼠脾脏细胞中细胞激素表现者,藉以获得该萃取物 , 其中,该萃取物包含一具抗肿瘤与免疫调节功能的 活性成分,且该活性成分包含一具有海藻糖残基末 端的多醣体或醣胜,其中该海藻糖残基系以-1, 2-海藻糖键键结于该多醣体或该醣胜的末端 。 2.如申请专利范围第1项所述的方法,其中该细胞激 素系选自IL-1、IL-6、IL-12、INF-、TNF-、GM-CSF、G -CSF及M-CSF所组成之族群。 3.如申请专利范围第1项所述的方法,其进一步包括 : (a)将步骤(4)中所获得之该萃取物以一缓冲液冲提 并通过阴离子交换树脂,以获得复数个次分馏物( subfraction);以及 (b)以该逆转录聚合链反应分析法,自该复数个次 分馏物中选出能提升调控细胞激素表现者。 4.如申请专利范围第3项所述的方法,其中该细胞激 素系选自IL-1、IL-6、IL-12、INF-、TNF-、GM-CSF、G -CSF及M-CSF所组成之族群。 5.如申请专利范围第3项所述的方法,其中步骤(a)所 使用之该缓冲液为氯化钠、氢氧化钠水溶液或其 混合液。 6.如申请专利范围第5项所述的方法,其进一步包含 : (i)将该步骤(b)中所获得之该次分馏物通过胶体过 滤层析树脂,以获得复数个分配次分馏物(partitioned subfraction);以及 (ii)以该逆转录聚合链反应分析法,自该复数个 分配次分馏物中选出能提升调控细胞激素表现者 。 7.如申请专利范围第6项所述的方法,其中该细胞激 素系选自IL-1、IL-6、IL-12、INF-、TNF-、GM-CSF、G -CSF及M-CSF所组成之族群。 8.一种具免疫调节功能的组合物,其系包括如申请 专利范围第1项中所述的方法所得之该萃取物。 9.如申请专利范围第8项所述的组合物,其系包括如 申请专利范围第3项所述的方法所得之该萃取物。 10.一种具免疫调节功能的组合物,其系包括如申请 专利范围第6项所述的方法所得之该分配次分馏物 。 11.一种具免疫调节功能的组合物,其系包括如申请 专利范围第6项所述的该分配次分馏物经蛋白质水 解酵素水解破坏蛋白质组成后所得之多醣体。 12.一种具抗肿瘤与免疫调节功能的组合物,其系藉 由下列步骤所制备,该步骤系包括: (1)将灵芝(Ganoderma lucidum)的植物组织均质; (2)使用0.1 N氢氧化钠水溶液萃取上述经均质的该 植物组织以获得一粗萃取物; (3)将该粗萃取物以Sephacryl S-500管柱进行胶体过滤 层析,并以一可于pH 7附近缓冲的Tris缓冲液冲提,以 形成复数个分馏物;以及 (4)以逆转录聚合链反应分析法,自步骤(3)该复数 个分馏物中选出能提升调控老鼠脾脏细胞中细胞 激素表现者, 其中,该组合物包括步骤(4)中所获得之该分馏物, 该分馏物包含一具抗肿瘤与免疫调节功能的活性 成分,且该活性成分包含一具有海藻糖残基末端的 多醣体或醣胜,其中该海藻糖残基系以-1,2-海 藻糖键键结于该多醣体或该醣胜的末端。 13.如申请专利范围第12项所述的组合物,包含步骤( 4)中所获得之该分馏物经以蛋白质水解酵素水解 破坏蛋白质组成后所得的多醣体。 14.如申请专利范围第12项所述的组合物,其中步骤( 4)中所获得的该分馏物进一步使用Diaion-WA30阴离子 交换器进行分配,并以氯化钠、氢氧化钠水溶液或 其混合液冲提,以获得复数个次分馏物,其中至少 有一该次分馏物能提升调控细胞激素表现,并且该 组合物包括能提升调控细胞激素表现之该次分馏 物。 15.如申请专利范围第14项所述的组合物,其中能显 着提升调控细胞激素表现之该次分馏物进一步以 TSK HW-75管柱进行胶体过滤层析,以获得复数个分配 次分馏物,其中至少有一该分配次分馏物能提升调 控细胞激素表现,并且该组合物包括能提升调控细 胞激素表现之该分配次分馏物。 16.一种用以抑制肿瘤细胞生长之医药组合物,其系 包括一有效剂量的如申请专利范围第12项所述之 该组合物。 17.一种用以抑制肿瘤细胞生长之医药组合物,其系 包括一有效剂量的如申请专利范围第14项所述之 该组合物。 18.一种用以抑制肿瘤细胞生长之医药组合物,其系 包括一有效剂量的如申请专利范围第15项所述之 该组合物。 19.一种用以调节免疫反应的医药组合物,其系包括 一有效剂量的如申请专利范围第12项所述之该组 合物。 20.一种用以调节免疫反应的医药组合物,其系包括 一有效剂量的如申请专利范围第14项所述之该组 合物。 21.一种用以调节免疫反应的医药组合物,其系包括 一有效剂量的如申请专利范围第15项所述之该组 合物。 22.一种萃取自灵芝(Ganoderma lucidum)的组合物,其系 包括一多醣体或醣胜的药学活性成分,该多醣体 或醣胜包括一具有-1,2-海藻糖键键结的末 端海藻糖残基。 23.如申请专利范围第22项所述之组合物,其中该多 醣体系为藉由对如申请专利范围第1、3或6项所述 之萃取物以蛋白质水解酵素水解破坏蛋白质组成 而得。 24.如申请专利范围第22项所述之组合物,其中该多 醣体系为藉由对如申请专利范围第12、14或15项所 述之组合物以蛋白质水解酵素水解破坏蛋白质组 成而得。 图式简单说明: 图一 灵芝多醣体之基本架构。 图二 样品经由不同水解酵素处理之生物活性之关 联性模式。 图三 系描述灵芝萃取物经使用Sephacryl S-500管柱进 行胶体过滤层析后的分馏物(分馏物1:100~130毫升; 分馏物2:130~155毫升;分馏物3:155~205毫升;分馏物4:205 ~220毫升;分馏物5:220~255毫升)。 图四 系描述以比色分析(MTT)对Con A刺激的细胞增 殖分析。A:粗灵芝萃取物;B:分馏物3。 图五 系描述当脾脏细胞与分馏物3一起培养时,检 测IL-1(A)、IL-2(B)、IFN-(C)表现,RT-PCR试验的胶体凝 胶电泳结果。 第1栏显示分子量标记(50 bp ladder);第2栏显示于分 馏物3存在时的看家基因(house keeping gene)(200 bp);第3 栏显示于分馏物3(A)存在时IL-1的表现(152 bp)、于分 馏物3(B)存在时IL-2的表现(167 bp)或于分馏物3(B)存 在时IFN-的表现(336 bp);第4栏显示当分馏物3不存 在时的看家基因;及第5栏显示当分馏物3不存在时, 没有观察到IL-1的表现。 图六 系显示经分馏物3处理后,老鼠脾脏细胞的蛋 白质体分析结果。胶片A(Gel A)系显示未经处理的 细胞、胶片B系显示经分馏物3处理后的细胞、胶 片C系显示当胶片A与胶片B比较时所消失的蛋白质 点,以及胶片D系显示当胶片A与胶片B比较时所出现 的蛋白质点。 图七 系显示当老鼠脾脏细胞与或不与0.1、1、10、 100ppm浓度的分馏物3共同培养6小时后,检测十种不 同细胞激素表现的RT-PCR试验,进行胶体凝胶电泳的 结果。 图八 系自分馏物F3G2中获得分馏物G2H1及分馏物G2H2 的色层分析图谱。(G2H1为收集第47管到第73管,G2H2 为第74管到89管;每管收集八毫升) 图九 系当老鼠脾脏细胞(2.2 106 cells/ml)经分馏物F 3(100g/ml)或分馏物F3G2(100g/ml)处理后,细胞GM-CSF 的表现。 图十 系当老鼠脾脏细胞(3 106 cells/ml)以分馏物F3( 100g/ml)或分馏物F3G2(100g/ml)处理后,细胞IFN- 的表现。 |
