发明名称 通用型基因打靶载体的构建方法
摘要 本发明公开了一种通用型基因打靶载体的构建方法,该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1),其中,在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列,将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)分别连入克隆载体pGEM-3Z,合成含有Bsp14071,Nhe1,Not1,Bsu151(Cla1),Bst11071,Pf12311,Spe1,Pst1,Sac II稀少酶切位点的序列,将这段序列插入正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间,正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间的酶切位点为稀少的酶切位点,从而便于不同基因作为同源臂插入。在基因打靶载体正选基因的两端加上Loxp序列便于后续工作中去除正选基因。
申请公布号 CN101117636A 申请公布日期 2008.02.06
申请号 CN200710017948.8 申请日期 2007.05.29
申请人 西北农林科技大学 发明人 陈兴启;张涌;孙达权;刘凤军;张玉玲
分类号 C12N15/63(2006.01) 主分类号 C12N15/63(2006.01)
代理机构 西安通大专利代理有限责任公司 代理人 李郑建
主权项 1.一种通用型基因打靶载体的构建方法,其特征在于,该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1),其中,在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列,将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)分别连入克隆载体pGEM-3Z,合成含有Bsp14071,Nhe1,Not1,Bsu151(Cla1),Bst11071,Pf12311,Spe1,Pst1,Sac II稀少酶切位点的序列,将这段序列插入正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间,正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间的酶切位点为稀少的酶切位点,从而便于不同基因作为同源臂插入。
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