一种EHV-1血清抗体检测试剂盒及制备方法和应用

摘要

本发明公开一种EHV‑1血清抗体检测试剂盒及制备方法和应用，EHV‑1血清抗体检测试剂盒采用由塑料小盒作为外壳，预制的NC膜和滤纸构成试剂盒内芯，试剂盒外壳为长方体结构，NC膜分别包被纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白和猪免疫球蛋白IgG，以纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白做为检测抗原，猪免疫球蛋白IgG为质检蛋白，按外壳盖‑NC膜‑滤纸‑外壳底的顺序组装起来，以金标SPA为二抗，以PBS为包被液，以PBS为洗涤液，采用抗原抗体特异性结合原理用来检测马血清样品中EHV‑1抗体情况，该方法快速、可视、操作简单，适合基层人员使用，具有广泛应用价值。

主权项

一种EHV‑1血清抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，具体采用如下方法步骤获得：（1）制备NC膜：NC膜分别包被纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白和猪免疫球蛋白IgG，其中EHV‑1 gD包涵体蛋白和猪免疫球蛋白IgG两种蛋白都采用滴加蛋白质溶液于NC膜自然晾干方法进行包被，纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白做为检测抗原，猪免疫球蛋白IgG为质检蛋白，其中，纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白采用将转入pET28a‑gD原核表达质粒的BL21（DE3）大肠杆菌经0.9 mmol/L的IPTG,25℃诱导表达6h后，对菌体进行超声裂解并利用PBS对裂解物进行洗涤，洗涤方法为PBS重悬的裂解产物12000 rpm离心5 min收集沉淀，重复3‑5次即可获得gD包涵体蛋白；（2）组装试剂盒：按盒底‑吸水材料‑NC膜‑盒盖的顺序组装起来，先将吸水材料放置在试剂盒底部，再将NC膜放置在吸水材料上方，最后将盒盖封闭盒体。