采用多菌灵特异性抗体检测食用菌中多菌灵含量的方法

摘要

本发明公开了一种采用多菌灵特异性抗体检测食用菌中多菌灵含量的方法。它是将2‑氨基苯并咪唑搅拌溶解于乙腈中，再加入丁二酸酐，40℃搅拌反应4h，过滤反应溶液得到滤渣，将滤渣用40℃的乙腈冲洗两次，得到粗产物，粗产物进一步经柱层析纯化，经薄层色谱及质谱鉴定得出，获得产物为2‑琥珀酰苯并咪唑。然后在2‑氨基苯并咪唑的2‑氨基处偶联4个碳的间隔臂作为半抗原，然后通过活化酯法偶联载体蛋白获得人工抗原；其次，通过动物免疫、纯化抗血清获得特异性的多克隆抗体；最后，利用该抗体建立的简便、快速、灵敏的直接竞争ELISA方法用于定量食用菌中的多菌灵，为食用菌中多菌灵含量的监测提供了重要的技术手段。

主权项

一种采用多菌灵特异性抗体检测食用菌中多菌灵含量的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）包被：将抗体用pH=9.6,0.01M碳酸缓冲液配制成5ug/mL的包被液，酶标板每孔加100uL包被液，4℃下孵育12h，甩干，用PBST洗3次；（2）加样：空白孔加100uLPBS；control孔加50uL PBS和50uL使用浓度的酶标抗原；其它实验孔每孔加50uL标品或样品，再加50uL酶标抗原（PBS稀释150倍），在酶标板振荡器上孵育0.5h，甩干，用PBST洗5次；（3）显色：显色使用14.6mL底物A和0.45mL底物B，二者在使用时混合，每孔加150uL，避光静置15min后，每孔加50uL1.25M硫酸终止反应，酶标仪读取OD值；其中底物A为:乙酸钠8.2g；β‑糊精2.5g；过氧化氢脲0.4290g；柠檬酸3.16g，双蒸水定容至1000mL，4℃备用；底物B:四甲基联苯胺250mg ，DMSO 定容至25mL，室温避光保存；所述PBS的成分为：磷酸氢二钠 13.76g；氯化钠 9g；磷酸二氢钠 1.38g，双蒸水定容至1000mL，4℃备用；PBST的成分为：PBS+0.05%吐温‑20。