一种NK细胞的制备方法

摘要

本发明涉及一种NK细胞的制备方法，该方法利用聚肌胞可诱导免疫细胞的分化、成熟或者分泌细胞因子，如IL‑12、IL‑15、TNFa、IFN‑r等，促进免疫细胞的活化增殖的能力。利用聚肌胞还可以促进膜结合型IL‑15Ra表达的能力，IL‑15Ra可与IL‑15紧密结合，这种结合状态的IL‑15对NK细胞有更强烈的促活化和促增殖的效应，将聚肌胞用于诱导培养NK细胞。本发明诱导培养的NK细胞满足了临床应用对细胞数量和细胞活性的要求。

主权项

一种NK细胞的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：步骤一，采集患者外周血，分离并收集外周血单个核细胞并用NK细胞无血清培养基接种于培养瓶中，并加入2％热灭活自体血浆；步骤二：培养第1天加入聚肌胞；培养第2天加入CD16单抗、IL‑2、IL‑18、IL‑15；第5天根据细胞增殖情况，调整细胞密度，加入IL‑2、IL‑18、IL‑15、IL‑12和2％热灭活自体血浆；步骤三：以后每2‑3天补液一次，根据细胞增殖情况，调整细胞密度，IL‑2、IL‑18、IL‑15、IL‑12和2％热灭活自体血浆；步骤四：培养至15‑20天，回收细胞。