用于MALDI TOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法

摘要

本发明公开了一种用于MALDI TOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法：首先将样本分离纯化，微生物纯菌落用培养基培养；挑取菌体，用超纯水悬浮、混匀；加入无水乙醇混匀，使其体积分数为70~80%，静置、离心，去上清；将沉淀的菌体恒温温育，然后加入50%的甲酸溶液，充分混合后，加乙腈溶液，甲酸与乙腈的体积比为1:1~1:3,菌体质量与混合液总体积比为0.5~1mg:10ul；混匀后静置；将混合溶液离心，吸取上清液点于样品点上，风干后加入基质溶液覆盖，干燥后即可进行菌体鉴定。本发明有效的缩短了提取时间，实现对菌体进行快速高效的提取，大大增加了图谱特征峰数量及图谱峰质量，提高了鉴定准确率。

主权项

一种用于MALDI TOF细菌及酵母类真菌鉴定的菌体预处理方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步，将样本进行分离纯化，得到的微生物纯菌落采用合适的培养基进行培养；第二步，从培养基中挑取适量的菌体，使用超纯水悬浮、混匀；第三步，加入无水乙醇，充分混匀，使混合液中无水乙醇的体积分数达到70~80%，静置1~5分钟；第四步，将第三步静置后的混合溶液10000~15000rpm/min转速离心3~5分钟，倒去上清；第五步，将沉淀的菌体在40℃±1℃条件下恒温温育5~25分钟，然后加入体积分数50%的甲酸溶液，充分混合后，再加入乙腈溶液，其中甲酸溶液与乙腈溶液的体积比为1:1~1:3,菌体的质量与混合液的总体积比为0.5~1mg:10ul；混匀后静置1~5分钟；第六步，将第五步的混合溶液8000~15000rpm/min转速离心2~3分钟，吸取上清液备用；第七步，将吸取的上清液点于样品点上，风干后加入基质溶液覆盖，干燥后即可进行菌体鉴定。