快速构建目标基因高表达的哺乳动物细胞株的体系和方法

摘要

本发明涉及应用突变与重组技术筛选可扩增性的高转录活性位点，并在位点处插入标记的方法。本发明还涉及应用位点特异性重组机制快速构建并获得目标基因高表达的哺乳动物细胞系的方法，即应用重组酶识别和切割一对重组信号序列(整合标记载体与靶向表达载体各具有一个)，完成位点特异性重组，实现目标基因的稳定高表达。

主权项

1.一种整合标记载体，包括以下元件或序列：A.显性选择标记；B.筛选标记；C.一或多个扩增基因，选自二氢叶酸还原酶、腺苷脱氨酶、二氢乳清酸酶、谷氨酰胺合成酶或氨甲酰磷酸合成酶；D.在微生物中增殖的遗传元件，选自微生物的复制起始点和/或抗生素抗性标记；E.重组信号序列，选自FRT、Loxp或AttB/AttP；其中，筛选标记和显性选择标记以融合蛋白形式表达，启动子和融合蛋白之间插入重组信号序列，起始密码子ATG位于重组信号序列之前，共同受控于一个弱化的启动子；而扩增基因也受控于弱化的病毒启动子，该扩增基因及其启动子可以位于载体上任何位置，只要不影响其他元件的功能即可。