产霍乱毒素霍乱弧菌环介导等温扩增快速检测方法

摘要

本发明涉及一种产霍乱毒素霍乱弧菌环介导等温扩增快速检测方法。其中的试剂包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；其中的反应液含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5-TGAATCCACGGCTCTTCCCT-TGGTTATGGATTGGCAGG-3、下游内引物5-GGTTGTGGGAATGCTCCAAG-ACTTTGGGTTTTTTCATCGC-3、上游外引物5-GATATTGCTCCAGCAGCA-3、下游外引物5-CGTCAAGGAATTTTACACCTAG-3和甜菜碱；检测产霍乱毒素霍乱弧菌的方法包括细菌DNA的提取、产霍乱毒素霍乱弧菌的环介导等温扩增、显色检测。本发明的优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

1. 环介导等温扩增检测产霍乱毒素霍乱弧菌的试剂，其特征是该试剂包括(1)-(4)：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、1.0—1.4mmol/L dNTP、4—8mmol/L硫酸镁(MgSO4)、0.8—1.6μmol/L上游引内物(FIP)、0.8—1.6μmol/L下游内引物(BIP)、0.2—0.3μmol/L上游外引物(F3)、0.2—0.3μmol/L下游外引物(B3)和1—1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷—盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X—100；其中上游内引物：5-TGAATCCACGGCTCTTCCCT-TGGTTATGGATTGGCAGG-3；下游内引物：5-GGTTGTGGGAATGCTCCAAG-ACTTTGGGTTTTTTCATCGC-3；上游外引物：5-GATATTGCTCCAGCAGCA-3；下游外引物：5-CGTCAAGGAATTTTACACCTAG-3；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶：8U/μL；(4)显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。