一种报春苣苔(Primulina tabacum Hance)组织培养繁殖及野外栽培方法

摘要

一种报春苣苔(Primulina tabacum Hance)组织培养繁殖及野外栽培方法，本发明以野外采集的报春苣苔植株叶片作为外植体，通过诱导培养步骤、丛芽繁殖步骤、生根培养步骤、移栽步骤和野外移栽步骤等培养阶段，调配和优选诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方，使报春苣苔能够实现其有效繁殖的目的。结合生态恢复原理将试管苗在发现报春苣苔的当地种植，实现报春苣苔在原生地的种植成活和生态恢复。

主权项

1.一种报春苣苔(Primulina tabacum Hance)组织培养繁殖及野外栽培方法，其特征在于以野外采集的报春苣苔植株叶片作为外植体，按以下步骤进行培养繁殖和栽培：(1)诱导培养步骤：将报春苣苔植株叶片外植体接插到诱导培养基培养，诱导报春苣苔叶片外植体体细胞胚胎发生或/和不定芽的形成，在20～30℃下，于黑暗培养或每天于1～20μmolm-2 s-1弱光照射12～14小时，培养50～70天，在外植体能够诱导形成体细胞胚或不定芽后，继续培养20-30天，所述的诱导培养基以MS基本培养基，附加钙220～440mg L-1，蔗糖20～30 g L-1，pH值6.5～7.5为基础，另配加有NAA 0.5～1.0mg L-1+TDZ 0.5～1.0mgL-1，或BAP 0.5～1.0mg L-1+TDZ 0.2～1.0mg L-1，或BAP 0.5～1.0mg L-1+NAA 0.5～1.0mg L-1；(2)丛芽繁殖步骤：将体细胞胚或不定芽转入到繁殖培养基上培养，条件为在20～30℃下，每天光照20～50μmol m-2 s-114小时，一个月至一个半月继代一次，所述的繁殖培养基以MS基本培养基，附加钙220～440mg L-1，蔗糖20～30g L-1，pH值6.5～7.5为基础，另配加有BAP 0.5～1.0mg L-1+NAA 0.1～0.5mg L-1；(3)生根阶段：将丛芽分切转入到生根培养基上光照培养诱导生根，成为试管苗，条件为20～30℃，每天光照20～50μmol m-2 s-114小时，生根培养基以MS基本培养基，附加钙220～440mg L-1，蔗糖20g L-1，pH值6.5～7.5为基础，另配加有IBA 0.2～1.0mg L-1和/或0.2％活性碳，试管苗在该培养基上培养1个月后进行移栽；(4)移栽阶段：将长根的试管苗移栽到移植到沙盆的基质中，放置于湿润、遮荫的环境下培养，沙盆中的基质按石灰石∶蛭石∶沙石＝(1～2)∶(2～4)∶(1～2)的比例配置；(5)野外移栽阶段：将经上述沙盆中壮苗后的试管苗种植于石灰岩洞口环境，与伴生种苔藓一同种植。