一种流感病毒的培养方法

摘要

一种流感病毒的培养方法，用山羊胎儿肾细胞培养作为流感病毒培养的细胞源。采用细胞冻融提取物对鸡胚培养的流感病毒进行预处理，所述细胞冻融提取物是动物成纤维细胞、小鼠胚胎干细胞的上皮样分化细胞的冻融提取物。本发明培养的流感病毒其毒价显著高于用现行技术培养的流感病毒。所用细胞为原代细胞，用于疫苗生产不存在癌变物质危险性；所用细胞来源较广，获取成本较低；流感病毒的预处理不用胰蛋白酶，避免了胰蛋白酶对产毒细胞的影响。

主权项

1、一种流感病毒的培养方法，其特征是用山羊胎儿肾细胞培养作为流感病毒培养的细胞源，具体操作步骤如下：A、选取怀孕2月龄以上的母山羊，在无菌条件下采用剖腹手术将羊胎儿连同胎膜一起取出，剥离胎膜，取出羊胎儿放入盛有无菌PBS溶液的培养皿中，洗涤2-3次，用手术器械剖开羊胎儿腹腔，取出肾脏，按照组织细胞原代培养方法，将羊胎儿肾组织制备培养成原代细胞；B、对采用鸡胚培养的流感病毒进行预处理；C、将预处理后的流感病毒接种于由羊胎儿肾组织培养成的原代细胞中，先按每个细胞瓶培养流感病毒所需培养基总量的1/4加入经预处理后的病毒液，37℃下，培养2-3小时后补足培养基，继续培养48-72小时，收集细胞培养液并在1500-2000转/分下离心10-20分钟取上清，得到含流感病毒的上清液。