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摘要

本发明涉及用于生成糖脂酰基转移酶变体的方法，包括：(a)选择特征为包含氨基酸序列基序GDSX的糖脂酰基转移酶作为亲本酶，其中X是下列氨基酸残基中的一种或多种：L、A、V、I、F、Y、H、Q、T、N、M、S；(b)修饰一个或多个氨基酸以生成糖脂酰基转移酶变体；(c)在半乳糖脂底物和任选磷脂底物和/或任选的甘油三酯底物上测试糖脂酰基转移酶变体的转移酶活性和任选水解活性；(d)选择对半乳糖脂的活性比亲本酶升高的酶变体；并任选(e)制备一定量的酶变体。本发明还涉及特征为包含氨基酸序列基序GDSX的脂酰基转移酶变体，其中X是下列氨基酸残基中的一种或多种：L、A、V、I、F、Y、H、Q、T、N、M、或S，且其中酶变体相对于亲本序列在第2组、第4组、第6组、或第7组限定的一个或多个氨基酸残基处包含一个或多个氨基酸修饰。

主权项

用于生成糖脂酰基转移酶变体的方法，包括：(a)选择特征为包含氨基酸序列基序GDSX的脂酰基转移酶作为亲本酶，其中X是下列氨基酸残基中的一个或多个：L、A、V、I、F、Y、H、Q、T、N、M或S；(b)更改一个氨基酸以生成脂酰基转移酶变体；(c)在半乳糖脂底物，和任选磷脂底物和/或任选甘油三酯底物上测试脂酰基转移酶变体的转移酶活性，和任选水解活性；(d)选择对半乳糖脂的活性比亲本酶升高的酶变体；并任选(e)制备一定量的酶变体；其中所述方法还包括下列步骤：结构同源性定位或序列同源性对比；其中结构同源性定位包括下列步骤：a)将亲本序列与通过P10480晶体结构坐标与1IVN.PDB进行的结构对比而获得的P10480结构模型相对比；b)选择活性位点中以甘油分子中央碳原子为中心的范围内的一个或多个氨基酸残基；c)测定依照步骤(b)选择的一个或多个氨基酸残基是否是高度保守的；和d)更改所述亲本序列中依照步骤(b)选择的一个或多个氨基酸，排除依照步骤(c)鉴定的保守区；其中序列同源性对比包括下列步骤：i)选择第一种亲本脂酰基转移酶；ii)鉴定具有期望活性的第二种相关脂酰基转移酶；iii)对比所述第一种亲本脂酰基转移酶与所述第二种相关脂酰基转移酶；iv)鉴定两种序列间不同的氨基酸残基；v)测定依照步骤(iv)选择的一个或多个氨基酸残基是否是高度保守的；和vi)更改所述亲本序列中依照步骤(iv)鉴定的一个或多个氨基酸残基，排除依照步骤(v)鉴定的保守区，其中生成的糖脂酰基转移酶变体的一个下列氨基酸残基与亲本序列相比被更改：S18M或T；Y30G、I、L、S、E、M、A或R；G40L、R、M、Q或V；N80R、D、P、G或E；N87R、D、E、M、C或G；N88W；Y179V、E、R、N或Q；H180T、K、Q或I；M209Y、L、K或M；L210N、D、H、R、E、A、Q、P、K、G、T、W、I、V、S或M；R211G、Q、K、D或T；N215H、L、G、V、R或Y，其中氨基酸残基的编号是通过对比变体序列与SEQ ID No.2参考序列而获得的，并且其中所述亲本序列获自杀鮭气单胞菌(Aeromonas salmonicida)并且由SEQ ID NO.29的核苷酸序列编码。