mRNA片段化方法及基于其构建测序文库的方法

摘要

本发明涉及一种mRNA片段化方法，以及基于该mRNA片段化方法构建测序文库的方法。本发明的mRNA片段化方法采用正、反向桥式探针，通过一步反转录及连接反应即可实现对mRNA样本的打断，且在反转录时同时引入两端接头，得到两端带有接头的cDNA文库。所得两端带接头的cDNA文库，可直接进行环化反应，也可先通过PCR扩增，再进行环化反应，从而得到单链环状核酸的测序文库，也可直接通过PCR扩增从而得到双链核酸的测序文库。本发明的mRNA片段化方法用于构建测序文库时，省去了传统方法建库中末端修复、先加一端接头、再加另一端接头的繁琐步骤，极大地简化了实验流程，缩短了建库周期，也大大降低了建库成本。

主权项

一种使mRNA样本片段化的方法，其包括：(1)以所述mRNA样本为模板，以下述正向桥式探针和反向桥式探针的混合物为引物，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应；所述反向桥式探针的3’端区域含双链DNA接头1，其5’端游离且为由4‑9个碱基组成的随机序列，该随机序列在逆转录反应过程中与mRNA模板随机结合，但不延伸；所述正向桥式探针的5’端区域含双链DNA接头2，其3’端游离且为由4‑9个碱基组成的随机序列，该随机序列在逆转录反应过程中与mRNA模板随机结合，并在逆转录酶的作用下向3’端延伸，直至所述反向桥式探针结合处；(2)在连接酶的作用下，使正向桥式探针经延伸的3’端与反向桥式探针的5’端进行连接反应，形成两端分别带双链DNA接头1、2的cDNA片段。