细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒及其应用

摘要

本发明提供的细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒，由PCR反应液1、标准品2、阳性对照品3、阴性对照品4、抽提裂解液5、操作说明书6、包装盒体7组成，盒体7设有容器孔，分别放置PCR反应液管1、标准品2、阳性对照品3、阴性对照品4、抽提裂解液5，PCR反应液管由单管分装，矩阵排列。本发明的试剂盒可在检测细菌DNA中应用。本发明方法运用实时荧光定量PCR技术实现了对常见菌通用检测的目的，有效地解决了以往PCR方法只能用于检测单一病原菌的问题，对常见的细菌感染进行通用检测，提高了细菌检测的通用性和敏感性，为细菌性感染疾病的早期病原体检测提供依据。

主权项

1.一种细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒，其特征是由PCR反应液(1)、标准品(2)、阳性对照品(3)、阴性对照品(4)、抽提裂解液(5)、操作说明书(6)、包装盒体(7)组成，包装盒体(7)设有容器孔，分别放置PCR反应液管(1)、标准品(2)、阳性对照品(3)、阴性对照品(4)、抽提裂解液(5)，PCR反应液(1)由单管分装，矩阵排列，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、细菌检测用上游引物、检测用下游引物、荧光探针、耐热DNA聚合酶，其中：上游引物序列为：5｀-CAACGCGAAGAACCTTACC-3｀下游引物序列为：5′-ACGTCATCCCCACCTTCC-3′。荧光探针序列为：5′-FAM-TAAGTCCCGCAACGAGCGCAA-TAMRA-3′。标准品序列为：CAACGCGAAG AACCTTACCT GGTCTTGACA TCCACAGAAC TTTCCAGAGATGGATTGGTG CCTTCGGGAA CTGTGAGACA GGTGCTGCAT GGCTGTCGTCAGCTCGTGTT GTGAAATGTT GGGTTAAGTC CCGCAACGAG CGCAACCCTTATCCTTTGTT GCCAGCGGTC CGGCCGGGAA CTCAAAGGAG ACTGCCAGTGATAAACTGGA GGAAGGTGGG GATGACGT抽提裂解液含有10mmol/L Tri-HCl，pH7.6，5mmol/L乙二胺四乙酸二钠，0.5％十二烷基硫酸钠；定量PCR反应液必须用0.22μm膜过滤预处理。