高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法

摘要

高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，涉及一种副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法。本发明是要解决现有副干酪乳杆菌的细菌素产量低的问题。方法：一、从副干酪乳杆菌HD1.7中扩增prcK基因；二、构建质粒pMD18‑T‑prcK；三、构建重组过表达载体pRSFDuet‑1‑prcK；四、构建重组过表达载体pRR‑tet；五、将过表达载体pRR‑tet电转化副干酪乳杆菌HD1.7感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。该基因工程菌株的抑菌能力比原始菌株提高了17.86％。传代后发酵液细菌素效价2373.46±46.27AU/mL，传代后效价比较稳定。本发明用于产细菌素。

主权项

高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、从副干酪乳杆菌HD1.7中扩增prcK基因；二、将prcK基因与pMD18‑T载体连接构建质粒pMD18‑T‑prcK；三、以表达质粒pRSFDuet‑1为骨架，向质粒上的多克隆位点插入目的基因prcK，构建重组过表达载体pRSFDuet‑1‑prcK；四、以表达质粒pRSFDuet‑1‑prcK为骨架，向质粒上的多克隆位点插入目的基因tet，构建重组过表达载体pRK‑tet；五、将过表达载体pRK‑tet电转化副干酪乳杆菌HD1.7感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。