一种检测大花蕙兰瘤菌根菌和/或矮伞形霉的试剂盒及方法

摘要

本发明公开一种检测大花蕙兰瘤菌根菌和/或矮伞形霉的试剂盒及方法。该试剂盒包含如SEQ ID NO.3～10所示的引物。本发明的方法采用前述试剂盒实现：以待检测样品的基因组DNA为模板，以正向外引物和反向外引物为引物对进行第一次PCR扩增，得到的PCR产物为模板，以正向内引物和反向内引物为引物对进行第二次PCR扩增，得到的PCR产物进行检测；当使用SEQ ID NO.3～6所示的引物，扩增得到435bp条带，表明待检测样品中存在瘤菌根菌；当使用SEQ ID NO.7～10所示的引物，扩增得到195bp条带，表明待检测样品中存在矮伞形霉。本发明适用于检测栽培条件下的瘤菌根菌及矮伞形霉，特异性强。

主权项

一种检测大花蕙兰瘤菌根菌和/或矮伞形霉的试剂盒，其特征在于：包含用于检测大花蕙兰瘤菌根菌的巢式PCR引物对和用于检测矮伞形霉的巢式PCR引物对；用于检测大花蕙兰瘤菌根菌的巢式PCR引物对的核苷酸序列如下：正向外引物M6F：5'‑ACGACGATGAAGATGTGATG‑3'；反向外引物M6R：5'‑GGAGGTGATACAGTGGGTG‑3'；正向内引物M6CF：5'‑ATGAAGATGTGATGAGAAGCA‑3'；反向内引物M6CR：5'‑ATTGGGATAAGGCAGAAGTAG‑3'；用于检测矮伞形霉的巢式PCR引物对的核苷酸序列如下：正向外引物Z3F：5'‑TCCTCCTCGTCCTGATTCCG‑3'；反向外引物Z3R：5'‑ATGTTTTCCCACCAGTAGCC‑3'；正向内引物Z3CF：5'‑TCAAGTCATTCCCGAACACAA‑3；反向内引物Z3CR：5'‑GTAGACAAACCAGGAGCCAGC‑3'。