主权项 |
1、一种培育东方百合试管鳞茎的方法,该方法采用以下步骤:(1)于9~10月份选择生长健壮的东方百合植株,取出鳞茎,对其进行病毒检测,筛选出不带病毒的鳞茎,用清水冲洗后,备用;(2)从鳞茎上分下鳞片,并用清水清洗,再用70%~75%的酒精浸泡15~20秒后,用无菌水漂洗4~6次,然后在0.1%升汞中浸泡消毒5~10分钟,再用无菌水漂洗6~10次,每次3~5分钟,最后用无菌滤纸吸干鳞片上的水份,备用;(3)将经步骤(2)处理后的鳞片切为3~4块,使每块鳞片均带有原鳞茎基部的组织;将切好的鳞片置于发生培养基上进行无菌培养,调节培养温度为2 0±0.5℃~26±0.5℃、光照强度10001x~40001x或黑暗培养,30~40天后诱导出不定芽;所述的发生培养基为含萘乙酸0.05~0.1mg/L、含蔗糖7%~9%、含琼脂0.65%的MS高盐培养基或1/2MS高盐培养基;(4)将不定芽转接到生长培养基上,黑暗培养,培养温度20±0.5℃~26±0.5℃,50~100天后,形成规格3cm~5cm的试管鳞茎;所述的生长培养基为含萘乙酸0.05~0.1mg/L、含蔗糖7%~9%、含琼脂0.6 5%的1/2~1/5MS高盐培养基;(5)在无菌条件下将试管鳞茎分成2~3片鳞片,将鳞片转接到扩繁培养基上,培养基PH值为5.5~6.5,培养光照强度1000-40001x,转接后12~30天诱导出不定芽;所述的扩繁培养基为含萘乙酸0~0.1mg/L、含蔗糖7%~9%、含琼脂0.65%的1/2~1/5MS高盐培养基;所述的1/2~1/5MS高盐培养基,是指培养基中每种大量营养元素的含量与MS高盐培养基中对应的大量营养元素含量的重量比为1/2~1/5,而微量营养元素、有机成分与MS高盐培养基相同的培养基;(6)重复步骤(4)和步骤(5)即可不断扩繁出符合要求的试管鳞茎。 |