发明名称 |
2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法 |
摘要 |
本发明公开了一种2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法,包括以下步骤:样品收集;样品预处理;纳米磁珠活化;唾液样品上样;纳米磁珠洗脱;数据采集;数据分析;建立诊断模型。本发明采用液态芯片联合MALDI技术检测2型糖尿病肾虚证患者的唾液蛋白质指纹图谱,从唾液蛋白质中筛选出9个有极显著的统计学意义的差异蛋白峰(P<0.001),选择质荷比为5744.34、2410.88两个差异蛋白质峰进行建模,识别率为91.7%,预测能力95.6%。本发明构建的模型能够正确地区分2型糖尿病肾虚证患者及不同的中医证型的患者,为临床疾病诊断及中医辩证客观化开辟了新途径,开拓了中医微观辩证学的研究新思路。 |
申请公布号 |
CN105784829A |
申请公布日期 |
2016.07.20 |
申请号 |
CN201610209058.6 |
申请日期 |
2016.04.06 |
申请人 |
深圳市老年医学研究所;吴正治 |
发明人 |
吴正治;孙珂焕;曹美群;黄飞娟;杨长青 |
分类号 |
G01N27/62(2006.01)I |
主分类号 |
G01N27/62(2006.01)I |
代理机构 |
北京国昊天诚知识产权代理有限公司 11315 |
代理人 |
刘戈 |
主权项 |
一种2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)样品收集;(2)样品预处理:收集的唾液样品在2h内置于转速3000r/min的4℃低温离心机离心10min,并按照50μl/管分装于冻存管,置于‑80℃冰箱冷冻保存备用;(3)纳米磁珠活化;(4)唾液样品上样:④取5μl唾液样品,加10μl的U9裂解液,混合孵育30min后,加入185μl的Wash Buffer稀释;⑤向含有活化磁珠的PCR管中加入100μl处理好的唾液样品,室温孵育30min,置于磁铁上孵育1min,去除上清液;⑥再往管中加入100μl的Wash Buffer洗脱5min,然后将PCR管置于磁铁上孵育1min,去除上清液;⑦重复步骤⑥一次;(5)纳米磁珠洗脱:每个PCR管中加入10μl的Elution Buffer,洗脱5min,放置于磁铁上孵育1min,取5μl上清液移至另一个PCR管中,并加入5μl的CHCA饱和溶液充分混匀,吸取2μl混合溶液加样到Au/Steel芯片上,风干,然后上机读取芯片,收集数据;(6)数据采集;(7)数据分析;(8)建立诊断模型:采用决策树算法计算出多个变量变化对两样本的判别价值,确定诊断模型。 |
地址 |
518020 广东省深圳市罗湖区东门北路1017号 |