一种结核分枝杆菌单克隆抗体制备方法

摘要

本发明提供了一种结核分枝杆菌单克隆抗体制备方法，该技术方案利用人型菌株制备出结核分枝杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，其所分泌的抗体为只针对人型菌株，与牛型结核分枝杆菌均不发生反应，从而保证了该单抗能够专门针对人型血清型疾病。与此同时，本发明利用该株单克隆抗体的特性，建立ELISA方法和免疫胶体金的方法，其特异性和敏感性好。可用于临床检测。此外，本发明制备的单抗效价高、特异性较好，尤其适用于进一步制备人型结核分枝杆菌抗原诊断试剂盒或人型结核分枝杆菌抗原诊断胶体金试纸。本发明以创新性的技术改进实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有突出的推广前景。

主权项

一种结核分枝杆菌单克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取人型结核分枝杆菌菌液作为抗原，与弗氏完全佐剂乳化后皮下注射小鼠，再于2周后、4周后以相同方法各免疫1次，6周后以相同剂量抗原腹腔注射小鼠；2)3天后，取上述小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞按5∶1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mL PEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，37℃静止10min，而后1000rpm离心10min；弃上清，用60mL HAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO₂培养箱内培养；3)利用间接ELISA检测的方法，对步骤2)上清液中的抗体进行检测，筛选出抗体阳性杂交瘤细胞；4)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×10⁶CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到结核分枝杆菌单克隆抗体。