基于磁性功能化PDMS芯片的蛋白激酶活性检测方法

摘要

本发明公开了一种基于磁性功能化PDMS芯片的蛋白激酶活性检测方法，属于微流控芯片技术领域。利用去甲肾上腺素在弱碱性条件下自聚合生成聚去甲肾上腺素包裹在Fe₃O₄磁性纳米颗粒表面，制成Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素纳米颗粒，通过外磁场将其固定于PDMS芯片通道内，再通过螯合反应把Ti⁴⁺固定于Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素功能化PDMS芯片通道内，利用Ti⁴⁺与磷酸根之间的相互作用，在微流控芯片通道内实现了未磷酸化多肽与磷酸化多肽的分离，并用于对蛋白激酶活性的快速和灵敏检测。

主权项

基于磁性功能化PDMS芯片的蛋白激酶活性检测方法，其特征在于，步骤如下：（1）合成Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素纳米颗粒：将25 mg采用水热法合成的Fe₃O₄磁性纳米粒子置于三颈瓶中，加入10 mL 50 mM pH 8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液，室温下机械搅拌2 h，再加入30 mg去甲肾上腺素并反应24 h，用外加磁铁将产物分离出来，用超纯水清洗三次，制成Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素纳米颗粒；（2）制备Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素‑Ti⁴⁺功能化PDMS芯片通道：PDMS芯片通道先用超纯水冲洗10 min后，在芯片通道的上方和下方分别放置两块永久磁铁，用真空泵将步骤（1）合成的Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素纳米颗粒溶液抽入分离通道中，用50 mM pH 8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液冲洗分离通道5 min，再用真空泵将Ti(SO₄)₂溶液抽入分离通道中5 min，静置4 h，用超纯水冲洗分离通道去除残余的Ti(SO₄)₂，得到Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素‑Ti⁴⁺功能化PDMS芯片通道；（3）检测蛋白激酶活性：在含有10 mM MgCl₂的50 mM pH 8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液中加入多肽、三磷酸腺苷和蛋白激酶，于37 °C水浴反应1 h，用真空泵将反应产物抽入Fe₃O₄@聚去甲肾上腺素‑Ti⁴⁺功能化PDMS芯片通道内，记录磷酸化多肽的电流信号，峰面积的大小与磷酸化多肽的浓度以及蛋白激酶的活性呈正相关，实现了对蛋白激酶活性的检测。