产生重组微生物的方法

摘要

本发明提供一种用于在微生物中插入、替换、缺失或以其它方式操控核酸序列以产生重组微生物的遗传工具。值得注意的是，本发明利用同源重组，其是其中核苷酸序列在两个相似或等同的DNA分子之间进行交换的遗传重组的一种类型。因为本发明涉及三个同源重组事件，所以其称为“三重交叉”方法。

主权项

一种产生重组微生物的方法，其包含：(a)提供包含遗传元件的微生物，所述遗传元件包含靶核酸T1、靶核酸T2和靶核酸T3，(b)提供DNA构建体，其包含与T1同源的左同源臂LHA1、与T2同源的右同源臂RHA1和与T3同源的右同源臂RHA2，其中RHA2位于LHA1和RHA1之间，(c)使(a)的所述遗传元件经历与(b)的所述DNA构建体的同源重组，从而T1与LHA1对准并且T2与RHA1对准以将LHA1和RHA1之间的所述DNA构建体的部分(包括RHA2)插入到T1和T2之间的所述遗传元件中，以及(d)使(c)的所述遗传元件经历自身同源重组，从而T3与RHA2对准以去除T3和RHA2之间的所述遗传元件的部分。