用于检测样品中靶蛋白质的蛋白质印迹免疫检测方法

摘要

本发明涉及亲水的高蛋白结合的低荧光蛋白质印迹膜。本发明涉及亲水的高蛋白结合的低荧光蛋白质印迹膜，所述膜特别适于印迹应用、优选蛋白质印迹。优选由PVDF制备的预湿润疏水膜基质与单体溶液接触，进行紫外光起始的自由基聚合步骤，使得该基质具有持久的亲水性。所形成的膜显示低背景荧光、高蛋白结合、优良的蛋白样品印迹形态保留以及扩大的动态范围(高信噪比，提高的样品可检测性)。该膜在蛋白质印迹应用中，尤其在低样品浓度蛋白检测中显示了比得上常规硝酸纤维素蛋白质印迹膜或比常规硝酸纤维素蛋白质印迹膜更高的性能，其可以直接用水湿润，而不需要使用前用醇预湿润。

主权项

一种用于检测蛋白质样品中的靶蛋白质的蛋白质印迹免疫检测试验方法，包括：从所述蛋白质样品电泳分离所述靶蛋白质；将所述分离的靶蛋白质转移到多孔聚合基质上，所述多孔聚合基质表面被包含丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的交联聚合涂层修饰，所述涂层使所述表面成为亲水性的，其中所述多孔聚合基质由聚偏氟乙烯制备，其表面被由丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺使用自由基聚合制备的交联聚合涂层修饰，其中在反应物溶液中丙烯酰胺单官能单体和亚甲基双丙烯酰胺交联单体的量为各自按重量计0.20％和2.00％之间，且其中所述表面被修饰的多孔聚合基质具有蛋白质结合能力，其通过IgG结合试验测定为约250‑325μg/cm²；封闭所述基质以防止抗体与所述基质表面的非特异性结合；将所述基质与能够结合所述靶蛋白质的第一抗体孵育；将所述基质与标记的第二抗体孵育，所述第二抗体能够与所述第一抗体的酶复合以提供可测量的信号；和检测所述信号。