一种食品及饲料中驴源成分检测侧向流试纸条检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了食品及饲料成中驴（Equus africanus asinus）成分的核酸快速检测试剂盒的制备方法及其应用方法，属于分子生物学和免疫学领域。本发明将核酸检测中的聚合酶链式反应的高灵敏度、高特异性方法与免疫学检测中的免疫胶体金快速检测技术相结合，通过设计独特的引物，并对引物进行标记，对提取的靶DNA进行特异性扩增以及扩增产物在展开液中与试纸条上固定的金标记抗体结合而形成稳定、可见的检测带及质控带，从而实现对食品及饲料中驴源成分快速、准确的检测。

主权项

一种食品及饲料中驴源成分的试纸条检测方法，其特征在于：采用以下两条引物进行PCR扩增反应，其中上游引物Donkey‑D‑F的序列为5′‑CCATATCAGCTCAACATACAATACTC‑3′，用抗原或半抗原分子生物素、异硫氰酸荧光素或地高辛中的一种标记；下游引物Donkey‑D‑R的序列为5′‑CCGTAGAAACCCCCACGTTTAG‑3′，用抗原或半抗原分子生物素、异硫氰酸荧光素或地高辛中的一种标记，其中上游引物和下游引物所用的标记物不同，所述引物在适宜的扩增条件下，可扩增驴线粒体基因组D‑loop区域一段长度为270 bps的DNA片段，所述PCR扩增反应的条件为：95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 sec；55 ℃退火30 sec；72 ℃延伸30sec，扩增30个循环，最后72 ℃ 延伸5 min；采用试纸条对PCR扩增反应产物进行检测，所述试纸条包括在带有不干胶的衬垫，按顺序有：（1）吸水滤纸垫，（2）结合物垫，（3）侧向层析基质，（4）检测带，（5）质控带，（6）衬底和（7）吸水垫；所述结合物垫上附有第一种核酸标记物的抗体或配体的生色颗粒，所述生色颗粒为胶体金或乳胶，所述侧向层析基质为硝酸纤维素膜或尼龙膜，所述检测带上附有第二种核酸标记物的抗体，所述质控带上附有可结合特定种属来源抗体的抗体。