一种模板扩增和信号放大结合检测核酸的方法

摘要

本发明涉及一种模板扩增和信号放大结合检测核酸的方法。先待测核酸分子通过模板的线性扩增得到核酸信号的第一次放大；再将扩增得到的RNA产物与放大桥分子、捕获桥分子一起加入到固相上进行杂交，将RNA产物捕获到固相上，而放大桥分子的一端与RNA产物杂交识别，另一端与下一步加入的放大分子结合，放大分子上连接的多个生物素分子再与标记物如辣根过氧化物酶结合，最终实现核酸信号的双重放大过程。本发明的检测核酸方法具有极高的灵敏度。

主权项

一种线性扩增与信号放大相结合的检测核酸的方法，其特征在于包括以下步骤：1)用商品化的试剂盒从样本中抽提出待测核酸或者直接裂解样本释放出待测核酸；2)核酸的线性扩增将待测核酸转化为带有启动子的双链DNA，再通过针对启动子的RNA聚合酶进行RNA扩增，得到RNA产物；3)应用多生物素分子对核酸信号放大a)涉及的功能分子的设计和合成捕获分子为寡核苷酸，包被于固相上；捕获桥分子为DNA，一端能与捕获分子部分杂交，另一端能与线性扩增的RNA产物部分杂交；放大分子包括载体分子和标记分子，所述载体分子为DNA或RNA，所述标记分子为生物素标记的多核苷酸，一个载体分子通过多核苷酸与多个生物素分子相连，标记分子本身带有的寡核苷酸与其他标记分子的寡核苷酸结合，标记分子相互杂交后的杂合体又和载体分子进行杂交；放大桥分子为DNA，一端能与线性扩增的RNA产物部分杂交，另一端能与载体分子部分杂交；b)将RNA产物与放大桥分子、捕获桥分子一起加入到固相上进行杂交，42‑50℃孵育1‑16小时，RNA产物通过捕获桥分子与预包被在固相上的捕获分子的特异识别而捕获到固相上；c)洗去未结合于固相上的RNA产物和放大桥分子、捕获桥分子，将放大分子加入到固相上，42‑50℃孵育0.5‑1小时；d)将标记物标记的链霉亲和素或亲和素加入到固相上，室温孵育；e)通过链霉亲和素或亲和素上的标记物的特征反应，实现核酸信号的放大和检测。