Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法

摘要

本发明公开了一种Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法。本发明将Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒结构蛋白前体基因P1和蛋白水解酶基因3CD在杆状病毒表达系统表达，制备并鉴定了鸭肝炎病毒样颗粒，为鸭肝炎病毒新型疫苗的研制奠定了基础。IFA结果显示重组蛋白在昆虫细胞中成功表达；以P3代病毒(MOI＝5)感染悬浮生长的昆虫细胞，收集细胞裂解液上清，可见直径约20～25nm的球形病毒样颗粒，与DHV天然病毒高度相似；Western blotting分析病毒样颗粒的结构组成，以Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒鸭多抗血清作为一抗，可见特异性结构蛋白条带，与理论值相符。本发明操作程序简便，易进行大规模生产，具有广阔的应用前景。

主权项

一种Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法，特征在于包括以下步骤：(1)将Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒结构蛋白前体基因P1和蛋白水解酶基因3CD克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual中，得到杆状病毒转移载体pFBD‑P13CD；(2)pFBD‑P13CD重组质粒的转座；(3)重组Bacmid DNA的获得与鉴定；(4)重组杆状病毒rBac‑P13CD的制备及扩增；(5)重组杆状病毒rBac‑P13CD感染宿主细胞制备病毒样颗粒；(6)病毒样颗粒的纯化。