基于特异性单克隆或多克隆抗体建立的NY-ESO-1抗原检测方法

摘要

本发明公开了一种基于特异性单克隆或多克隆抗体建立的NY‑ESO‑1抗原检测方法，所述方法以NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原制备特异性的抗NY‑ESO‑1抗体。将抗NY‑ESO‑1抗体与胶乳微球偶联制备抗体偶联物，然后将上述偶联物与外周血待测样品混合反应5‑10min，最后在检测546nm处吸光值，根据标准曲线获得样品中NY‑ESO‑1抗原浓度；本发明还提供一种化学发光检测方法，采用直接发光模式。本发明所述外周血中NY‑ESO‑1抗原的检测方法可在生化分析仪和化学发光免疫分析仪等大型自动化仪器上进行大样本自动化检测。本发明方法检测灵敏度0.01‑10ng/mL。

主权项

一种基于特异性单克隆或多克隆抗体建立的NY‑ESO‑1检测方法，其特征在于所述方法为：以NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原制备抗NY‑ESO‑1抗体，将抗NY‑ESO‑1抗体与胶乳微球偶联制备抗体偶联物；然后将待测样品与试剂a混合，25‑37℃反应3‑5min，再加入抗体偶联物，25‑37℃反应5‑10min，检测546nm处吸光值，根据标准曲线获得待测样品中NY‑ESO‑1重组蛋白浓度；所述抗NY‑ESO‑1抗体为抗NY‑ESO‑1单克隆IgG抗体或抗NY‑ESO‑1多克隆IgG抗体；所述试剂a质量组成为：35g/L聚乙二醇‑6000，牛血清白蛋白5g/L，溶剂为pH6.8的缓冲液；所述标准曲线按如下方法制备：用NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原制备抗NY‑ESO‑1特异性抗体，将抗NY‑ESO‑1特异性抗体与胶乳微球偶联制备特异性抗体偶联物，再将NY‑ESO‑1重组蛋白按0‑250ng/ml梯度浓度用含体积浓度0.1‑1％牛血清白蛋白的缓冲液稀释成稀释液，以无抗原成份的含所述牛血清白蛋白的缓冲液为空白对照，然后将试剂b与不同浓度稀释液混合，25‑37℃反应5‑10min，最后再加入特异性抗体偶联物，25‑37℃反应5‑10min，分别测定546nm处吸光值，以吸光值为纵坐标，以稀释液中NY‑ESO‑1重组蛋白浓度作为横坐标制作标准曲线；所述抗NY‑ESO‑1特异性抗体为抗NY‑ESO‑1特异性单克隆IgG抗体或抗NY‑ESO‑1特异性多克隆IgG抗体；所述试剂b组成同试剂a。