RNA引导的基因驱动

摘要

公开了RNA引导的Cas9基因驱动及其使用方法。本发明的实施方式是基于使用RNA引导的DNA结合蛋白与引导RNA在靶DNA位点处共定位并发挥基因驱动的作用。本发明范围内包括的DNA结合蛋白包括由RNA引导的那些，在本文中称为引导RNA。DNA结合包括天然产生的具有核酸酶活性的DNA结合蛋白，如Cas9蛋白。根据一个方面，本发明的酶，如Cas9展开DNA双链体并且检索与cdRNA匹配的序列以切割。

主权项

一种改变生物体的真核种系细胞的方法，包括向所述种系细胞中导入编码RNA引导的DNA结合蛋白核酸酶和一种或多种引导RNA，并且包含相应启动子序列以及第一侧接序列和第二侧接序列的第一外来核酸序列，其中，所述一种或多种引导RNA与所述种系细胞的染色体对的第一染色体和第二染色体的基因组DNA上的一个或多个靶位置互补，其中，编码所述RNA引导的DNA结合蛋白核酸酶的核酸序列与编码所述一种或多种引导RNA的核酸序列在所述第一侧接序列和所述第二侧接序列之间，其中，所述第一侧接序列包含与所述基因组DNA的第一染色体或第二染色体上的靶位置的第一部分相同的第一序列，其中，所述第二侧接序列包含与所述基因组DNA的第一染色体或第二染色体上的靶位置的第二部分相同的第二序列，表达所述第一外来核酸序列以产生所述RNA引导的DNA结合蛋白核酸酶和所述一种或多种RNA，其中所述RNA引导的DNA结合蛋白核酸酶和相关的引导RNA共定位于所述基因组DNA的第二染色体和所述基因组DNA的第一染色体上的相关靶位置，并且所述RNA引导的DNA结合蛋白核酸酶以切割位点特异性的方式在靶位置处切割所述基因组DNA的第一染色体，并且以切割位点特异性的方式在靶位置处切割所述基因组DNA的第二染色体，将所述第一外来核酸序列在切割位点处插入所述基因组DNA的染色体对的第一染色体中，并且将所述第一外来核酸序列在切割位点处插入所述基因组DNA的染色体对的第二染色体中，以赋予所述种系细胞对所述外来核酸序列的纯合性。