Verfahren und Vorrichtung zur Lokalisation einzelner Farbstoffmoleküle in der Fluoreszenzmikroskopie

摘要

Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Vorrichtung zur Lokalisation einzelner Farbstoffmoleküle in der Fluoreszenzmikroskopie. Das Verfahren umfasst: Erhalten von Weitfeldmikroskopie-Informationen der zu untersuchenden fluoreszenzmarkierten Probe mittels Weitfeldfluoreszenzmikroskopie unter Verwendung von strukturiertem Beleuchtungslicht, wobei die Weitfeldmikroskopie-Informationen die räumliche Ausdehnung der Probe in wenigstens einer räumlichen Richtung und/oder die Farbstoffschwerpunktposition in dieser Richtung umfassen; Erhalten von Lokalisierungsinformationen der Probe mittels Lokalisationsmikroskopie durch Beleuchten der Probe mit Beleuchtungslicht mit einer Intensität bzw. Intensitätsdichte, die in einem Intensitätsfenster von etwa 1 kW/cm2 bis 1 MW/cm2 liegt, wobei die fluoreszierenden Moleküle der zumindest einem fluoreszierenden Markierung statistisch und einzeln aus einem nicht fluoreszierenden Zustand in einen fluoreszierenden Zustand und unter Aussendung von Fluoreszenzlicht in einen langlebigen inaktiven Zustand überführt werden; und Detektieren wenigstens eines Teils des Fluoreszenzlichts durch einen Information erhaltenden Sensor, wodurch mindestens ein Bild der Probe erhalten wird, und Durchführen einer Lokalisation der einzelnen fluoreszierenden Moleküle im Bildraum; und Kombinieren der Weitfeldmikroskopie-Informationen mit den Lokalisierungsinformationen.