慢性肾小球肾炎唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

摘要

本发明公开了一种慢性肾小球肾炎唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：样品收集；样品预处理；纳米磁珠活化；唾液样品上样；纳米磁珠洗脱；数据采集；数据分析；建立诊断模型。本发明运用液态芯片结合MALDI‑TOF‑MS技术对慢性肾小球肾炎患者与正常对照组的睡液蛋白质进行表达谱检测，从唾液蛋白质组初步筛选出可用于慢性肾小球肾炎病证结合诊断的具有特异性的生物标记物，探索并建立了相关病证结合的诊断模型。该方法与传统的疾病生物标志物相关的检测方法相比较，具有无创伤性、操作简便、快捷、敏感性及特异性高等特点，其筛选出的生物标志物对于准确快速地疾病诊断、证候鉴别、预后判断均具有重要的临床意义。

主权项

一种慢性肾小球肾炎唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品收集；(2)样品预处理：收集的唾液样品在2h内置于转速3000r/min的4℃低温离心机离心10min，并按照50μl/管分装于冻存管，置于‑80℃冰箱冷冻保存备用；(3)纳米磁珠活化；(4)唾液样品上样：④取5μl唾液样品，加10μl的U9裂解液，混合孵育30min后，加入185μl的Wash Buffer稀释；⑤向含有活化纳米磁珠的PCR管加入100μl处理好的唾液样品，室温孵育30min，置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑥再往PCR管加入100μl的Wash Buffer，洗脱5min，并置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑦再重复步骤⑥一次，以洗脱更干净，获得较纯的目的蛋白；(5)纳米磁珠洗脱：每个PCR管加入10μl的Elution Buffer，洗脱5min，放置于磁铁上孵育1min，取5μl上清液移至另一个PCR管中，并加入5μl的CHCA饱和溶液充分混匀，吸取2μl混合溶液加样到Au芯片上，风干，然后上机读取芯片，收集数据；(6)数据采集；(7)数据分析；(8)建立诊断模型：采用决策树算法计算出多个变量变化对两样本的判别价值，确定诊断模型。